《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》是江蘇中洋集團股份有限公司於2015年3月23日申請的專利，該專利的公布號為CN104686423A，申請號為2015101253613，授權公布日為2015年6月10日，發明人是錢曉明、朱永祥、蔡星、秦桂祥、於傑、黃創新、徐逍。
《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》包括步驟：首先進行連續4代的群體選育，群體選育後出現了兩種性狀分離比較明顯的群體作為下一步家系選育的基礎選育群體，藉助分子標記技術輔助家系的構建，每個家系親本所產後代單獨養殖，建立以家係為單元的基礎群體，形成一個大的生產單元，對每個獨立的生產單元進行群體選育，在三個養殖階段、商品魚培育階段以及成熟前進行六次選擇，下一世代的選育重複上述步驟。該發明的優點為：可以高效的選出優勢親本，與此同時利用分子標記技術進行遺傳分析，可以在育種前了解親本的遺傳狀況，指導親本配對，從而達到科研與生產相結合的目的，並且有效地實現家系內優勢個體的選擇，兼具了優選育種與資源利用。
2018年12月20日，《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》獲得第二十屆中國專利優秀獎。
基本介紹
- 中文名：一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法
- 公告號：CN104686423A
- 授權日：2015年6月10日
- 申請號：2015101253613
- 申請日：2015年3月23日
- 申請人：江蘇中洋集團股份有限公司
- 地址：江蘇省南通市海安縣中壩南路98號
- 發明人：錢曉明、朱永祥、蔡星、秦桂祥、於傑、黃創新、徐逍
- Int.Cl.：A01K61/00(2006.01)I
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,技術目的,技術內容,有益效果,技術領域,權利要求,實施方式,選育方式,實施效果,榮譽表彰,
專利背景
暗紋東方魨屬魨形目（Tetraodontiformes），魨亞科（Tetraodontoidei），魨科（Tetraodontidae），東方魨屬（Takifugu）。截至2015年3月23日，全中國已有上海、江蘇、浙江、安徽、廣東、福建、四川、河南、湖北、海南等省市開展了淡水暗紋東方魨的養殖，暗紋東方魨日漸成為一種養殖名優品種，是一種經濟和營養價值都比較高的水產品之一。但一般的養殖品種隨著養殖的不斷進行都不可避免的出現種質資源退化、近交衰退等現象，故要想從根本上提高水產品的數量和質量，必須培育出優良的新品種。水產動物中常用的選育方法主要有群體選育、家系選育、分子標記輔助育種等。
群體選育是生產單位進行選育常用的方法，具有快速分離出較為理想個體的優點，但該方法選育出的個體可能是雜合體，長期採用此法可能會帶來種質資源分化、遺傳純度降低等問題且大規模的群體選育會消耗大量的人力物力。家系選育是當今水產育種中培育新品種的重要方法之一，該法具有遺傳背景清晰、系譜明了、選育後代純合度高、選育效果顯著等優點。然而家系選育是選擇一對親本自交產生後代，基因庫會不斷地減小，且家系養殖群體內規模不夠大時，優良性狀基因不能得到充分的表達，影響選育效果。分子標記輔助育種具有以下優點：可同時以多個基因為目標進行材料的篩選，將多個基因聚合到同一個育種材料中，使其品質得到改良；可提前對目標性狀進行篩選；可反映DNA水平上的遺傳變異，因此，能夠在生長的各個時期進行選擇，不會受到環境的影響，大大提高了目的基因選擇的效率和準確性，拓寬了育種的方法和途徑，然而分子標記的開發工作較為繁瑣，工作量較大，且很多基因的功能尚未明確，對選育有一定的阻礙。
中洋集團是世界上最大的河豚魚養殖基地，規模化養殖條件優勢突出，擁有足夠數量的育種群體和生產單元，《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》利用群體選育快速篩選出具有優良性狀的親本，再利用家系選育保留優良性狀，純化優良基因，保證子代遺傳背景清晰且高的純合度。同時，在育種過程中配合分子育種的方法挑選遺傳距離較遠的親本，從而解決了近交衰退的問題。由此依據此綜合遺傳育種的方法能高效培育出性狀優良、遺傳背景清晰、基因庫較大、遺傳穩定的群體。
發明內容
技術目的
經過歷代養殖與選育發現，最初的暗紋東方魨體呈棕褐色，養殖過程中暗紋東方魨現已出現兩種性狀優良、抗病力強的群體，其中一類為保留引種群體體色和花紋的個體稱為野生型個體，另一類體色加深、花紋特徵不明顯但生長速度較快的稱之為黑色個體，《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》中進一步將這兩種優良性狀的群體作為基礎群體進行家系遺傳選育，由此，我們開發了一種新的育種方法，首先以分子標記為指導構建家系，每個家系親本所產後代單獨養殖在大水體中，將每個大水體看作一個生產單元繼續進行家系內的群體選育，結合暗紋東方魨的生產—從魚苗到成熟一共進行6次篩選，該育種方法採用家系育種的理念，融合了分子標記技術和群體選育技術，充分發揮環境對基因的影響，克服了家系選育中因家系個體少而不具代表性的弊病，使得基因充分表達，達到生產與科研相結合的目的。
技術內容
《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》所揭示的一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，其具體步驟為：
a．基礎親魚選擇
從群體中挑選體格健壯、色澤好、性腺發育良好的暗紋東方魨作為繁殖的親魚進行連續四代群體選育，在群體選育後出現兩種性狀分離明顯的群體，分別是野生暗紋東方魨及黑色暗紋東方魨；
b．建立家系
以野生暗紋東方魨和黑色暗紋東方魨作為基礎選育群體，利用分子標記技術對親本DNA進行檢測，統計分析並計算出親本個體之間的相似度和遺傳距離等遺傳參數，並根據個體間的遺傳距離指導親本1對1的配組繁殖，結合遺傳距離以及形態特徵構建了80個家系，其中分為20個黑色自交家系，40個黑色與野生正反交配對家系及20個野生型自交家系；
c．以生產單元為基礎的群體選育
將每個家系作為一個生產單元，從魚苗到親魚分別在孵化後、50日齡、210日齡、370日齡、530日齡和690日齡進行篩選，最終選擇出存活率高，體格健壯、無外傷、色澤好、條紋清晰、活力強、性腺發育良好及生長速度快的家系作為配種親本，在整個選育的過程中，為了減少環境條件的差異，確保每個家系在各階段的養殖空間的大小、水溫、鹽度、光照、溶氧和餌料條件保持一致，同時在不同的養殖階段，保證各家系的養殖數量一致；
d．第二代家系選育親魚配種
通過Populations軟體對步驟c中選育出的配種親本進行計算，得到雌雄個體間的遺傳距離矩陣，根據雌雄個體間的遺傳距離和形態特徵指導上述親本進行1對1配對繁殖，選取遺傳距離排名前80的雌雄個體作為待配對的親本，建立第二代選育家系80個；取遺傳距離較小的雌雄個體建立對照家系20個，人工催產授精，受精後每個家系的受精卵分別放入不同的孵化桶中分別進行孵化，孵化水溫20-24℃，溶氧6毫克/升以上，鹽度小於1‰，孵化時間4-5天，得到第二代家系選育的魚苗；
e．對80組第二代選育家系和20組第二代對照組家系重複步驟b~d的選育步驟，得到第三代魚，開展新一輪的家系選育。
所述步驟c中六次篩選的具體步驟分別為：
第一次篩選：80個家系的魚苗孵化後統計各家系魚苗的孵化率和成活率，在產卵量為12-18萬粒卵的個體中選擇孵化率在90%以上的家系中選擇68個作為要保留的家系，在每個家系中選擇10萬尾孵化仔魚轉移至溫室苗種培育池進行強化培育；
第二次篩選：待魚苗培育至3-4厘米後，挑選成活率高、活力強、趨光性好的家系轉移至野化馴養池中，觀察統計各家系魚苗生長、抗病、攝食的情況，其中選擇的家係數量為50個，每個家系保留5萬尾；
第三次篩選：同年放置的魚苗養至10月底時要再一次轉移至溫室越冬，轉移時選擇標準為活力強，生長速度快，選擇生長和抗逆性排在前40的家系繼續單獨養殖，每個家系保留1萬尾，在溫室養殖時不斷對養殖條件進行最佳化，採用海水養殖並逐漸增加鹽度模擬河豚魚天然海水養殖環境，保證各家系的養殖環境一致；
第四次篩選：越冬結束後還需將魚轉移至野外露天池中育肥，在轉池的過程中進行第四次篩選，選擇目標有三：一是生長速度，即選擇魚群中生長最快的個體；二是形態特徵，凡是形態特徵不明顯的個體均予以淘汰，三是遺傳純度，選留排名靠前30的家系繼續單獨養殖，每個家系保留5000尾轉至野外露天池單獨養殖；
第五次篩選：此時暗紋東方魨已基本達到商品魚的規格，統計商品魚的體重、體長、花紋、均勻度的生物學和商品指標，按照體重和花紋指標選擇20個家系，每個家系保留500尾魚單獨養殖並使其接近性成熟；
第六次篩選：親魚成熟前，要對其進行強化培育，將第五次篩選後的魚轉移至親魚培育池，轉移時選留體格健壯、無外傷、色澤好、條紋清晰、活力強、性腺發育良好的家系10個，每個家系保留備用親本50尾，統計備用親本的表型性狀和遺傳學特性。
所述第六次篩選中，表型性狀包括體重、全長、體長、體寬、體厚的指標，遺傳學特性包括個體的遺傳距離、遺傳相似度、育種值。
有益效果
《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》所述的暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，具有以下優點：
1.《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》採用了群體—家系—分子的育種模式，首先利用群體選育擴大育種親本的基因庫，使後面家系選育的候選基因更多更全，然後結合分子標記進行家系育種，既提高了遺傳純度，又確保了遺傳多樣性，改善了家系選育中近親交配基因庫快速縮小的弊病。
2.《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》採用大水體養殖選育，在生產養殖的環境條件下直接進行選育，這樣選育的結果更具有代表性，更能發揮環境基因對魚類生長的影響，使選育的基因充分表達，與此同時還達到科研和生產相結合的目的，在進行選育工作的同時還可以對生產進行最佳化從而取到雙贏的效果。
3.採用分子標記技術指導親本配對，計算個體間的遺傳距離、近交係數以及遺傳相似度等參數，按照這些參數挑選下一代魚的親本進行配對，可避免近親交配引起的近交衰退等問題，這樣經過2~3代即可獲得具有優良性狀的群體。通過此種育種模式既能實現暗紋東方魨的快速、高效選育，又能避免近交衰退，實現長期選育。
技術領域
《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》涉及水產養殖品種良種選育的方法，具體來說是一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方式。
權利要求
1.一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，其特徵在於：包括如下步驟：
a.基礎親魚選擇從群體中挑選體格健壯、色澤好、性腺發育良好的暗紋東方魨作為繁殖的親魚進行連續四代群體選育，在群體選育後出現兩種性狀分離明顯的群體，分別是野生暗紋東方魨及黑色暗紋東方魨；
b.建立家系以野生暗紋東方魨和黑色暗紋東方魨作為基礎選育群體，利用分子標記技術對親本DNA進行檢測，統計分析並計算出親本個體之間的相似度和遺傳距離等遺傳參數，並根據個體間的遺傳距離指導親本1對1的配組繁殖，結合遺傳距離以及形態特徵構建了80個家系，其中分為20個黑色自交家系，40個黑色與野生正反交配對家系及20個野生型自交家系；
c.以生產單元為基礎的群體選育將每個家系作為一個生產單元，從魚苗到親魚，分別在孵化後、50日齡、210日齡、370日齡、530日齡和690日齡進行六次篩選，最終選擇出存活率高，體格健壯、無外傷、色澤好、條紋清晰、活力強、性腺發育良好及生長速度快的家系作為配種親本，在整個選育的過程中，為了減少環境條件的差異，確保每個家系在各階段的養殖空間的大小、水溫、鹽度、光照、溶氧和餌料條件保持一致，同時在不同的養殖階段，保證各家系的養殖數量一致；
d.第二代家系選育親魚配種通過Populations軟體對步驟c中選育出的配種親本進行計算，得到雌雄個體間的遺傳距離矩陣，根據雌雄個體間的遺傳距離和形態特徵指導上述配種親本進行1對1配對繁殖，選取遺傳距離排名大的雌雄個體作為待配對的親本，建立第二代選育家系80個；取遺傳距離較小的雌雄個體建立對照家系20個，人工催產授精，受精後每個家系的受精卵分別放入不同的孵化桶中分別進行孵化，孵化水溫20-24℃，溶氧6毫克/升以上，鹽度小於1‰，孵化時間4-5天，得到第二代家系選育的魚苗；
e.對80個第二代選育家系和20個第二代對照組家系重複步驟b～d的選育步驟，得到第三代魚，開展新一輪的家系選育。
2.根據權利要求1所述的一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，其特徵在於：所述步驟c中六次篩選的具體步驟分別為：
第一次篩選：80個家系的魚苗孵化後統計各家系魚苗的孵化率和成活率，在產卵量為12-18萬粒卵的個體中選擇孵化率在90％以上的家系中選擇68個作為要保留的家系，在每個家系中選擇10萬尾孵化魚苗轉移至溫室苗種培育池進行強化培育；
第二次篩選：待魚苗培育至3-4厘米後，挑選成活率高、活力強、趨光性好的家系轉至野化馴養池中，觀察統計各家系魚苗生長、抗病、攝食的情況，其中選擇的家係數量為50個，每個家系保留5萬尾；第三次篩選：同年放置的魚苗養至10月底時要再一次轉移至溫室越冬，轉移時選擇標準為活力強，生長速度快，選擇生長和抗逆性排在前40的家系繼續單獨養殖，每個家系保留1萬尾，在溫室養殖時不斷對養殖條件進行最佳化，採用海水養殖並逐漸增加鹽度模擬河豚魚天然海水養殖環境，保證各家系的養殖環境一致；
第四次篩選：越冬結束後還需將魚轉至野外露天池中育肥，在轉池的過程中進行第四次篩選，選擇目標有三：
一是生長速度，即選擇魚群中生長最快的個體；二是形態特徵，凡是形態特徵不明顯的個體均予以淘汰，三是遺傳純度，選留排名靠前30的家系繼續單獨養殖，每個家系保留5000尾轉至野外露天池單獨養殖；
第五次篩選：此時暗紋東方魨已基本達到商品魚的規格，統計商品魚的體重、體長、花紋、均勻度的生物學和商品指標，按照體重和花紋指標選擇20個家系，每個家系保留500尾魚單獨養殖並使其接近性成熟；
第六次篩選：親魚成熟前，要對其進行強化培育，將第五次篩選後的魚轉移至親魚培育池，轉移時選留體格健壯、無外傷、色澤好、條紋清晰、活力強、性腺發育良好的家系10個，每個家系保留備用親本50尾，統計備用親本的表型性狀和遺傳學特性。
3.根據權利要求2所述的一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，其特徵在於：所述第六次篩選中，表型性狀包括體重、全長、體長、體寬、體厚的指標，遺傳學特性包括個體的遺傳距離、遺傳相似度、育種值。
實施方式
選育方式
《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》所揭示的一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，其具體步驟為：
a．基礎親魚選擇
從群體中挑選體格健壯、色澤好、性腺發育良好的暗紋東方魨作為繁殖的親魚進行連續四代群體選育，在群體選育後出現兩種性狀分離明顯的群體，分別是野生暗紋東方魨及黑色暗紋東方魨；
b．建立家系
以野生暗紋東方魨和黑色暗紋東方魨作為基礎選育群體，利用分子標記技術對親本DNA進行檢測，統計分析並計算出親本個體之間的相似度和遺傳距離的遺傳參數，並根據個體間的遺傳距離指導親本1對1的配組繁殖，結合遺傳距離以及形態特徵構建了80個家系，其中分為20個黑色自交家系，40個黑色與野生正反交配對家系及20個野生型自交家系；
c．以生產單元為基礎的群體選育
將每個家系作為一個生產單元，從魚苗到親魚分別在孵化後、50日齡、210日齡、370日齡、530日齡和690日齡進行篩選，最終選擇出存活率高，體格健壯、無外傷、色澤好、條紋清晰、活力強、性腺發育良好及生產速度快的家系作為配種親本，在整個選育的過程中，為了減少環境條件的差異，確保每個家系在各階段的養殖空間的大小、水溫、鹽度、光照、溶氧和餌料條件保持一致，同時在不同的養殖階段，保證各家系的養殖數量一致；
第一次篩選：80個家系的魚苗孵化後統計各家系魚苗的孵化率和成活率，在產卵量為12-18萬粒卵的個體中選擇孵化率在90%以上的家系中選擇68個作為要保留的家系，在每個家系中選擇10萬尾孵化仔魚轉移至溫室苗種培育池進行強化培育；
第二次篩選：待魚苗培育至3-4厘米後，挑選成活率高、活力強、趨光性好的家系轉至野化馴養池中，觀察統計各家系魚苗生長、抗病、攝食的情況，其中選擇的家係數量為50個，每個家系保留5萬尾；
第三次篩選：同年放置的魚苗養至10月底時要再一次轉移至溫室越冬，轉移時選擇標準為活力強，生長速度快，選擇生長和抗逆性排在前40的家系繼續單獨養殖，每個家系保留1萬尾，在溫室養殖時不斷對養殖條件進行最佳化，採用海水養殖並逐漸增加鹽度模擬河豚魚天然海水養殖環境，保證各家系的養殖環境一致；
第四次篩選：越冬結束後還需將魚轉至野外露天池中育肥，在轉池的過程中進行第四次篩選，選擇目標有三：一是生長速度，即選擇魚群中生長最快的個體；二是形態特徵，凡是形態特徵不明顯的個體均予以淘汰，三是遺傳純度，選留排名靠前30的家系繼續單獨養殖，每個家系保留5000尾轉至野外露天池單獨養殖；
第五次篩選：此時暗紋東方魨已基本達到商品魚的規格，統計商品魚的體重、體長、花紋、均勻度的生物學和商品指標，按照體重和花紋指標選擇20個家系，每個家系保留500尾魚單獨養殖並使其接近性成熟；
第六次篩選：親魚成熟前，要對其進行強化培育，將第五次篩選後的魚轉移至親魚培育池，轉移時選留體格健壯、無外傷、色澤好、條紋清晰、活力強、性腺發育良好的家系10個，每個家系保留備用親本50尾，統計備用親本的表型性狀和遺傳學特性，其中表型性狀包括體重、全長、體長、體寬、體厚的指標，遺傳學特性包括個體的遺傳距離、遺傳相似度、育種值。
d．第二代家系選育親魚配種
通過Populations軟體對步驟c中選育出的配種親本進行計算，得到雌雄個體間的遺傳距離矩陣，根據雌雄個體間的遺傳距離和形態特徵指導上述親本進行1對1配對繁殖，選取遺傳距離排名前80的雌雄個體作為要配對的親本，建立第二代選育家系80個；取遺傳距離較小的雌雄個體建立對照家系20個，人工催產受精，受精後每個家系的受精卵分別放入不同的孵化桶中分別進行孵化，孵化水溫20-24℃，溶氧6毫克/升以上，鹽度小於1‰，孵化時間4-5天，得到第二代家系選育的魚苗；
e．對80組第二代選育家系和20組第二代對照組家系重複步驟b~d的選育步驟，得到第三代魚，開展新一輪的家系選育。
下面以三代選育為例對《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》進行具體描述：
第一代選育：
一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，具體步驟為：
a．基礎親魚選擇
從群體中挑選體格健壯、色澤好、性腺發育良好的暗紋東方魨作為繁殖的親魚進行連續四代群體選育，在群體選育後出現兩種性狀分離明顯的群體，分別是野生暗紋東方魨及黑色暗紋東方魨；
b．建立家系：
以野生和黑色為基礎選育群體，2008年4月，利用分子標記技術對親本DNA進行檢測，統計分析並計算出親本雌雄之間的相似度和遺傳距離等遺傳參數，根據個體間的遺傳距離指導親本1對1的配組繁殖，配組原則是遺傳距離遠的配在一組，利用符合上述原則的親本構建80個第一代選育家系，具體可概括為20個黑色自交家系，40個黑色與野生正反交配對家系，20個野生型自交家系。
c．80個第一代選育家系的魚隔離養殖，經人工催產受精後，將孵化出的魚苗按家系放置在不同的溫室池塘中進行早期培育，培育的水溫為18℃~28℃，溫室採用砂石底水泥池，砂石厚0.2米~0.3米，池塘規格為20米×20米，水深0.5米~0.8米，魚苗放養密度為150尾/米2~250尾/米2；魚苗下池初期餌料以輪蟲、枝角類、鹵蟲幼體為主（5000個/升~10000個/升），同時輔以投餵豆漿（每天每畝地用3-4k克黃豆磨成豆漿），分3次~4次全池潑灑；之後進行轉餌即投餵配合飼料，投餵量為魚體重的10%~15%，分6次~8次投餵。魚苗放養一周后，每3d~5d加注新水一次，每次加深0.1米。
d．每個家系選擇4厘米以上的魚苗並將其轉移至野外露天池馴化養殖，露天池面積為10畝，野化馴養池水溫為18℃~30℃，溶解氧>6.0毫克/升，NH4+-N<0.5毫克/升，NO2--N<0.1毫克/升，pH是7.0-8.5；採用在配合飼料中增加鮮活餌料，日投餵量為魚體重的1.0%~2.0%，每天早、中、晚各投餵1次。
e．越冬選擇：越冬前統計各家系的生長狀況，按照選育目標（生長速度、形態特徵、遺傳純度）每個家系保留10000尾左右生長狀況良好、花紋特徵整齊的子代定向養殖。
f．越冬結束後還需將魚轉至野外露天池馴化，在轉池的過程中進行一次選擇，按照選育目標再一次進行定向選擇，這時每個家系保留5000尾左右至野外露天池單獨養殖。
克．親魚成熟前，要對其進行強化培育，將上述魚轉移至親魚培育池，這一過程進行最後一次選擇，每個家系挑選出體格健壯、無外傷、色澤好、條紋清晰、活力強、性腺發育良好的暗紋東方魨作為備用親本，每個家系保留備用親本50尾左右，統計備用親本的表型性狀和遺傳學特性，表型性狀包括體重、全長、體長、體寬、體厚等指標，遺傳學特性包括個體的遺傳距離、遺傳相似度、育種值等等。
h．利用分子標記技術對備用親本的DNA進行檢測，計算出備用親本雌雄個體之間的遺傳距離、遺傳相似度等遺傳參數，根據雌雄個體間的遺傳距離指導親本進行1對1配對繁殖，選取雌雄間遺傳距離排在前80的親本建立家系，得到第二代選育家系80個；取遺傳距離較小的雌雄個體建立對照家系20個，人工注射激素催產，採用乾法人工授精，孵化在圓錐體形孵化器中進行，水溫20-24℃，溶氧6毫克/升以上，鹽度小於1‰，將受精卵灑於孵化器中流水或充氣換水孵化，孵化時間4-5天。
第二代選育：
一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，具體步驟為：
a．建立家系：
2010年4月，以80組第二代選育家系和20組第二代對照家系建立家系。
b．對家系進行人工催產和授精後，實際產生73個選育家系和18個對照家系，孵化出的魚苗一直隔離養殖，在魚苗成熟前一直伴隨著以生產單元為基礎的群體選育。
c．養至2011年12月，共收穫3650尾選育系魚和900尾對照系魚，測量每尾魚的體重、體長和體高等數據；運用分子標記技術對親本DNA進行檢測，統計分析並計算出親本雌雄之間的相似度和遺傳距離等遺傳參數，根據個體間的遺傳距離指導親本1對1的配組繁殖，建立80個選育系，20個對照系；
d．對親本進行人工注射激素催產，採用乾法人工授精，孵化在圓錐體形孵化器中進行，水溫20-24℃，溶氧6毫克/升以上，鹽度小於1‰，將受精卵灑於孵化器中流水或充氣換水孵化，孵化時間4-5天，得到第三代家系選育的魚苗。
第三代選育：
一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法，具體步驟為：
a．建立家系：2012年4月，以80組第三代選育家系和20組第三代對照家系建立家系。
b．對家系進行人工催產和授精後，實際產生71個選育家系和17個對照家系，孵化出的魚苗一直隔離養殖，在魚苗成熟前一直伴隨著以生產單元為基礎的群體選育。
c．養至2013年12月，共收穫3550尾選育系魚和850尾對照系魚，測量每尾魚的體重、體長和體高等數據；運用分子標記技術對親本DNA進行檢測，統計分析並計算出親本雌雄之間的相似度和遺傳距離等遺傳參數，根據個體間的遺傳距離指導親本1對1的配組繁殖，建立80個選育系，20個對照系。
d．對親本進行人工注射激素催產，採用乾法人工授精，孵化在圓錐體形孵化器中進行，水溫20-24℃，溶氧6毫克/升以上，鹽度小於1‰，將受精卵灑於孵化器中流水或充氣換水孵化，孵化時間4-5天，得到第四代家系選育的魚苗，開展新一輪的家系選育。
實施效果
2014年4月，將經過3代選育後的暗紋東方魨苗種和未經過選育的暗紋東方魨苗種分江蘇和廣東連個實驗基地進行生長對比試驗，其中保證了兩組苗種處於相同的養殖管理條件：
江蘇實驗基地結果：選育的暗紋東方魨苗種在4月中、下旬出膜，養殖到越冬前，同時對選育的暗紋東方魨和未選育的暗紋東方魨進行抽樣測量分析，其中育的暗紋東方魨的平均體重為106.42±30.12克，對照組平均體重為80.23±20.31克，而未選育的暗紋東方魨平均體重為81.56±18.93克，選育的暗紋東方魨的比對照組生長快24.61%，比未經選育組生長快23.36%，結果表明，選育系個體具有明顯的生長優勢。
廣東實驗基地結果：選育的暗紋東方魨苗種在4月中、下旬出膜，養殖到越冬前，同時對選育的暗紋東方魨和未選育的暗紋東方魨進行抽樣測量分析，其中在相同的養殖條件下，選育的暗紋東方魨的平均體重為128.67±46.38克，未經選育的平均體重為103.36±35.34克，選育暗紋東方魨比未經選育的暗紋東方魨生長快19.67%，結果顯示，選育個體具有明顯的生長優勢。
榮譽表彰
2018年12月20日，《一種暗紋東方魨群體—家系—分子綜合遺傳育種的方法》獲得第二十屆中國專利優秀獎。
