《一種新4/8型alpha鎮痛芋螺多肽的作用靶點及結構功能研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由劉珠果擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：一種新4/8型alpha鎮痛芋螺多肽的作用靶點及結構功能研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉珠果
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
神經元菸鹼型乙醯膽鹼受體（nAChRs）是最重要的離子通道及膜蛋白之一，與學習、感覺、疼痛等多種信號傳導密切相關。Alpha-芋螺多肽能作用於不同亞型的nAChRs，對發現nAChRs亞型的功能及治療藥物具有重要意義。前期我們從中國南海芋螺中發現了一系列新的Alpha-芋螺多肽，其中一種具有新穎胺基酸序列的Alpha-芋螺多肽Vt1.27屬於一種目前未見報導的亞型，合成純化了該肽並發現其具有很高的鎮痛活性（大鼠PNL和CCI模型）。本課題將採用雙電極電壓鉗方法測定其對nAChRs亞型的確切靶點及選擇性,採用Ala取代的方法揭示其關鍵的胺基酸殘基，進一步採用鹼性、酸性或疏水胺基酸等替代獲得突變體，並測定突變體對nAChRs亞型的活性及鎮痛活性。通過以上研究，以闡明Vt1.27對nAChRs的活性及選擇性，揭示其結構與功能的關係，並為進一步鎮痛藥物開發和研製新型神經藥理探針奠定基礎。
結題摘要
本項目主要研究一種新4/8型alpha鎮痛芋螺多肽Vt1.27的作用靶點及結構與功能關係的研究，目前已經順利完成任務書規定的研究內容，取得了較好的結果。實際完成的研究內容有以下幾個方面：（1）合成、摺疊、純化了Vt1.27的多肽，得到了16mg純品，測定了Vt1.27的NMR結構（2）利用雙電極電壓鉗檢測了Vt.27對不同神經型菸鹼乙醯膽鹼受體亞型的活性和選擇性，發現了Vt1.27對神經型菸鹼乙醯膽鹼受體α3β2具有較好的活性，而對其他乙醯膽鹼受體沒有顯著作用。（3）利用膜片鉗這一關鍵技術，我們研究了Vt1.27對GABA介導的高電壓的鈣離子通道的活性以及對低電壓鈣離子通道（L型），鈉離子通道（Na1.4，Na1.5）的活性，發現Vt1.27除對Cav2.2通道具有一定抑制活性外，對上述其它通道均沒有明顯作用,我們在大鼠DRG細胞中也證實了其對大鼠DRG細胞的鈉離子和鉀離子通道沒有任何作用。(4) 採用Ala取代的方法，設計併合成純化了7個Vt1.27的突變體，測定了Vt1.27系列突變體對乙醯膽鹼受體α3β2的活性，發現其9位的胺基酸對其活性較為重要。（5）我們根據計算機模擬分析和Ala取代的實驗結果，設計合成了3個突變體，採用大鼠神經性疼痛模型，測定了這3個突變體的鎮痛活性，發現其中一個突變體Vt1.27-P-COOH的鎮痛活性顯著提高。通過以上研究我們闡明了Vt1.27鎮痛多肽的結構活性關係，得到了一個鎮痛活性顯著提高的突變體，為進一步鎮痛藥物開發和研製新型神經藥理探針奠定了基礎。
