《一種基於公共引物介導的白血病分子診斷技術研究》是依託蘇州大學，由孫萬平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：一種基於公共引物介導的白血病分子診斷技術研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：孫萬平
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
多重PCR已廣泛套用於基因檢測領域。然而，引物間的相互作用和檢測通量低一直是多重PCR發展和套用的主要技術瓶頸。我們前期研究表明，公共引物介導的多重PCR可將多重引物濃度降低8個數量級，不僅有效降低了引物間相互作用，同時可提高多重PCR檢測通量。本研究以38種白血病融合基因作為檢測靶標，通過建立公共引物設計方法和原則、探討公共引物介導的多重PCR最佳化方法及採用多重巢式PCR對融合基因進行分型分析，從而建立完整的公共引物介導的多重PCR檢測方法體系；同時，針對目前臨床白血病融合基因診斷方法難以推廣套用的困境，研發公共引物介導的可推廣套用於臨床的白血病融合基因便捷、高通量檢測試劑盒，為本檢測方法推廣套用於病原體檢測、腫瘤診斷、食品安全檢測、法醫鑑定、個體化醫學等眾多多重PCR套用領域提供參考資料和示範。
結題摘要
多重PCR在基因檢測領域具有廣泛應價值。然而，引物間的相互作用和檢測通量有限一直是多重PCR發展和套用的主要技術瓶頸。本研究針對這一技術難題設計了公共引物介導的多重PCR技術。實驗結果顯示，公共引物介導的多重PCR技術可將多重引物濃度降低8個數量級，不僅有效降低了引物間相互作用，同時可提高多重PCR檢測通量。在該多重PCR反應技術體系中，公共引物起關鍵作用，本研究建立了一種高效篩選公共引物的方法，通過正向引物（m條）和反向引物（n條）間的不同排列組合，可實現m×n對公共引物的敏感性的篩選工作，達到降低成本，高效篩選目的。該方法不僅可以用於公共引物的篩選，也可用於特異引物敏感性的篩選。為進一步驗證該技術體系的套用價值，本課題以白血病融合基因、腦炎病原體及轉基因大豆作為檢測對象，研發相應的檢測方法和試劑盒。1.以白血病融合基因作為檢測靶標，成功構建了兩個具有高特異性和敏感性的公共引物介導的多重RT-PCR體系，體系1針對6種最常見的白血病融合基因（BCR/ABL e1a2型，PML/RARα S型, E2A/PBX1 I型，BCR/ABL e13a2型， PML/RARα L型以及AML1/ETO型），其檢測敏感性最高可達10個拷貝；體系2針對11種常見白血病融合基因（BCR/ABLe1a2型和e13a2、PML/RARα 的L型和S型、AML1/ETO、E2A/PBX1 I、E2A/HLF、TEL/AML1、TEL/ABL、SIL/TAL1和CBFβ/MYH11 A型），在保證特異性的前提下，敏感性最高可達100個拷貝。兩體系均通過臨床標本的驗證。2. 針對腦炎常見6種病原體（S.agalactiae，L.monocytogenes， S.pneumoniae，N.meningitis，H.influenza和 S.aureu）構建的的多重體系，其檢測的特異性及敏感性可用於臨床標本的檢測。 3.針對目前農業部已頒發安全證書的12種轉基因大豆，成功構建了公共引物介導的多重PCR檢測體系，本體系敏感性達到了0.1%（0.1ng/100 ng樣品DNA）。因此，通過本項目的研究，建立了完整的“公共引物”介導的多重PCR檢測技術體系，該技術體系可推廣套用於病原體檢測、腫瘤診斷、食品安全檢測等眾多多重PCR套用領域提供參考資料和數據。
