《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》是哈爾濱珍寶製藥有限公司於2012年2月29日申請的專利，該專利的申請號為2012100497551，公布號為CN102579532A，授權公布日為2012年7月18日，發明人是方同華。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》涉及一種刺五加組合物，含其製劑及其含量檢測方法，每克該組合物中含有總黃酮50-120毫克、紫丁香苷12.5-30毫克和刺五加苷E4-15毫克。該發明提供的組合物及製劑在降血糖、降血脂、男性不育症方面具有療效。
2018年12月20日，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》獲得第二十屆中國專利優秀獎。
基本介紹
- 中文名：一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法
- 公告號：CN102579532A
- 授權日：2012年7月18日
- 申請號：2012100497551
- 申請日：2012年2月29日
- 申請人：哈爾濱珍寶製藥有限公司
- 地址：黑龍江省哈爾濱市哈爾濱開發區哈平路集中區煙臺一路8號
- 發明人：方同華
- Int.Cl.：A61K36/254(2006.01)I; A61P5/00(2006.01)I; A61P9/00(2006.01)I; A61P9/10(2006.01)I等
- 代理機構：北京路浩智慧財產權代理有限公司
- 代理人：王朋飛、張慶敏
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
刺五加（Radix Acanthopanacis Senticosl）為五加科五加屬植物的根、根莖及莖，主要分布在中國東北部、俄羅斯遠東地區、日本北海道及朝鮮等地。始見於東漢《神農本草經》，別名為五加參、老虎釕自、刺拐棒（東北）。《本草綱目》記載刺五加能“補力益精，明目下氣”，能“補五勞七傷，久服輕身耐老”，具有益氣健脾，補腎安神之功效。
刺五加的主要功效成分為酚苷類及其某些苷元類成分，主要包括刺五加總苷和總黃酮等：
刺五加總苷具有7種型式，其主要活性成分為刺五加苷B、刺五加苷E：刺五加苷B又稱紫丁香苷（Syringin），相對含量最多，也是刺五加中的主要藥效成分之一，具有抗疲勞、增強免疫力、護肝和釋放乙醯膽鹼，增加胰島素分泌，防輻射等作用；刺五加苷E具有緩解壓力、抗焦慮、抗應激、抗潰瘍和抗疲勞等作用。
刺五加總黃酮是刺五加中重要的天然有效活性成分，具有廣泛的藥理活性，能擴張血管，增加冠狀動脈血流量，降低心肌耗氧量，抗心肌缺血，改善心電圖，抗異位心律，降低血壓，鎮靜安神。由於刺五加總黃酮的多種生物活性及良好的臨床效果，多年來在中國國內外已成為中藥提取及中草藥現代化研究的焦點之一。其主要藥效成分異嗪皮啶是刺五加苷B1的苷元，具有明顯的抗炎和抗菌作用。
現代臨床研究表明，刺五加主要用於治療神經官能症、腎上腺皮質功能低下症、腫瘤患者因放療化療引起的白細胞減少、風濕性及類風濕性關節炎、肺心病、低血壓和糖尿病等症。
刺五加活性成分的提取研究主要是採用水提、甲醇提、乙醇回流提取和超臨界CO2萃取法等，其中超臨界CO2萃取的選擇性高、操作時間短、有效成分得率高，但其缺點是受處理量的限制，產量低，截至2012年2月工業開發難度較大，因而仍以水提、有機溶劑提取為主，且多數僅以單一成分作為衡量提取工藝參數優劣的指標，難以保證刺五加的全部有效成分得到充分的提取分離和利用。
在2010年版中國藥典一部中“刺五加浸膏”公開了如下內容，第一是提取方法，分別為水煎煮或醇提，具體為：水煎煮方法，刺五加1000克，粉碎成粗粉，加水煎煮兩次，每次3小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成浸膏50克（水浸膏）；醇提方法：取刺五加1000克，粉碎成粗粉，加75％乙醇，回流提取12小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮成浸膏40克（醇浸膏），即得。
中國專利申請200710117640.0（簡稱07年專利）公開了水提醇沉的提取方法，1）採用水提醇沉法製備刺五加藥物浸膏；2）將浸膏加水稀釋，用石灰乳調節pH至10.00-12.00，攪拌均勻後用硫酸調節pH至4.5-6.5，靜置，抽取上清液過濾，濃縮，醇沉；3）冷藏靜置除雜得刺五加提取液；或濃縮減壓乾燥得刺五加提取物。該方法存在煎煮時間短，有效成分尤其是刺五加苷E成分不能被充分提出，石灰乳調鹼前採用二次醇沉方法除雜，在去除雜質的同時有效成分損失也較大的缺點。
而中國專利申請201010165556.8（下簡稱為2010年專利）在07年專利的基礎上，進一步公開了刺五加的提取方法，包括以下步驟：將刺五加切成碎片，加水煎煮，合併煎液，減壓濃縮，加入乙醇至醇含量為70-75％，靜置濾過，回收乙醇後加水稀釋至生藥重量的3-6倍，用石灰乳調pH值至10.0-12.0，靜置4小時以上，再用硫酸將pH值調至5.0-6.0，靜置過濾，濃縮，加入乙醇至醇含量為80-85％，靜置過濾，離心分離雜質，藥液回收乙醇後濃縮乾燥，即得。該方法同樣存在煎煮時間短，有效成分尤其是刺五加苷E成分不能被充分提出的缺點，醇沉次數雖然減少至1次，但有效成分損失仍較大。
2007年專利說明書實施例5公開的由提取物製備注射液的製備方法為：取實施例2的提取物，加注射用水使溶解，用40％的NaOH溶液調pH值至5.5，攪拌均勻後加熱，加入0.2％的活性炭，煮沸吸附15分鐘，冷卻至50攝氏度以下用40％的NaOH溶液調pH值至5.7，補加新鮮注射用水至含生藥5克/毫升。經0.45微米濾膜過濾至澄清，灌裝，115攝氏度高壓滅菌40分鐘。冷凍，緩化後冷藏20天，常溫放置3.5個月。0.65微米濾芯過濾，加注射用水至含生藥5克/毫升，調pH值至5.0，加入活性炭脫色，過濾，調pH值至5.0，補加注射用水至含生藥5克/毫升，分別經0.45微米、0.22微米濾芯精濾，灌封，115攝氏度30分鐘滅菌，即得。該方法第一次高壓滅菌易導致溶液pH值下降，使有效成分分解、被破壞掉。而且冷凍步驟使溶液迅速凝固成固體，不利於雜質成分的沉降。冷藏及常溫放置的時間較長，不利於大生產。
中國專利申請201010165556.8公開的注射液的製備方法為：取提取物加注射用水稀釋，100-120攝氏度熱處理，過濾，0-4攝氏度冷藏處理，過濾，調pH值至5.5，活性炭處理，過濾，滅菌，冷藏處理，超濾，灌裝，滅菌，即得。該方法在加入活性炭進行脫色處理前後各進行了一次冷熱處理，目的是除雜，但由於第一次冷熱處理後不能將雜質徹底除去就進行活性炭脫色處理，致使1）脫色處理不完全，溶液顏色較深；2）若增加活性炭用量保證溶液顏色符合要求，則部分有效成分會被活性炭吸附除去，含量損失大。
截至2012年2月紫丁香苷的含量檢測方法為：照高效液相色譜法（2010年版中國藥典一部附錄VID）測定。
色譜條件與系統試用性實驗，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸溶液為流動相B，按照表1中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為220納米；柱溫30攝氏度。理論板數按照紫丁香苷峰計算應不低於10000；異嗪皮啶峰與相鄰雜質峰的分離度應不小於1.5。
時間 | 流動相A（％） | 流動相B（％） |
0-20 | 10→20 | 90→80 |
20-30 | 20→25 | 80→75 |
30-40 | 40 | 60 |
40-50 | 10 | 90 |
對照品溶液的製備：取紫丁香苷對照品，刺五加苷E對照品、異嗪皮啶對照品適量，精密稱定，加甲醇（刺五加苷E對照品先加50％甲醇溶解）製成每1毫升含紫丁香苷、刺五加苷E各40微克、異嗪皮啶10微克的混合溶液，即得。
供試品溶液的製備：取該品約0.2克，精密稱定，置小燒杯中，用50％甲醇20毫升，分次溶解，轉移至25毫升量瓶中，超聲處理（功率250瓦，頻率50千赫茲）10分鐘，取出，放冷，加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法：分別精密吸取對照品溶液10微升與供試品溶液10-20微升，注入液相色譜儀，測定，即得。
同時藥典還規定，該品水浸膏中含紫丁香苷（C17H24O9）不得低於0.60％、刺五加苷E（C34H46O18）不得少於0.30％、異嗪皮啶（C11H10O9）不得少於0.10％；醇浸膏含紫丁香苷（C17H24O9）不得少於0.50％、刺五加苷E（C34H46O18）不得少於0.30％、異嗪皮啶（C11H10O9）不得少於0.12％。
截至2012年2月檢測方法採用普通高效液相色譜法，檢測時間一般為50分鐘，時間較長，當日生產批次較多時，檢測工作量大幅增加，很難及時向生產部門提供檢測數據。
發明內容
專利目的
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》的目的是提供一種刺五加組合物。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》的另一目的在於提供一種刺五加組合物的製備方法。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》的另一目的還在於提供一種含刺五加組合物的製劑。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》的另一目的還在於提供一種含刺五加組合物的製劑的製備方法和檢測方法。
技術方案
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的一種刺五加組合物，含有總黃酮50-120毫克/克、紫丁香苷12.5-30毫克/克和刺五加苷E4-15毫克/克。
優選地，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的刺五加組合物，含有總黃酮60-120毫克/克、紫丁香苷15-30毫克/克和刺五加苷E6-15毫克/克。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》還提供了一種製備刺五加組合物的方法，包括以下步驟：
1）稱取刺五加，粉碎，加水浸泡30分鐘後煎煮2-3次，每次加入4-8倍量水，煎煮2-3小時，濾過，其中水為飲用水、純化水或注射用水；
2）待濾液溫度降到50攝氏度以下時，用20％石灰乳調節pH值至10.0-12.0，攪拌均勻；再用20％硫酸調節pH值至5.0-6.0，攪拌均勻，靜置4小時以上，濾取上清液，濃縮成在80攝氏度測定相對密度為1.10-1.20的濃縮膏；待濃縮膏溫度降至50攝氏度以下時，邊加入乙醇邊攪拌使含醇量達83-85％，充分攪拌，靜置12小時以上，濾過，濾液回收乙醇至無醇味並濃縮至在80攝氏度測定相對密度為1.15-1.20，即得。
上述方法中，所述步驟2）中：
待濾液溫度降至50攝氏度以下中50攝氏度以下優選為30-50攝氏度；
靜置4小時以上中4小時以上優選為4-8小時；
待濃縮膏溫度降至50攝氏度以下中50攝氏度以下優選為30-50攝氏度；
靜置12小時以上中12小時以上優選為12-24小時。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》還提供了含上述刺五加組合物的製劑，由刺五加組合物組成，或由刺五加組合物和藥學上可接受的載體或稀釋劑組成。
所述製劑為注射液、凍乾粉針劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑或合劑。
所述製劑為注射液，該注射液中含總黃酮1.8-6.5毫克/毫升、紫丁香苷0.14-2.2毫克/毫升和刺五加苷E0.06-1.0毫克/毫升。
優選地，所述注射液中含總黃酮1.8-6.5毫克/毫升、紫丁香苷0.16-2.2毫克/毫升和刺五加苷E0.06-1.0毫克/毫升。
進一步優選地，所述注射液中含總黃酮1.8-6.5毫克/毫升、紫丁香苷0.20-2.2毫克/毫升和刺五加苷E0.06-1.0毫克/毫升。
更進一步優選，所述注射液中含總黃酮1.8-6.5毫克/毫升、紫丁香苷0.22-2.2毫克/毫升和刺五加苷E0.10-1.0毫克/毫升。
優選地，所述注射液中含總黃酮4.5-5.5毫克/毫升、紫丁香苷0.35-2.2毫克/毫升和刺五加苷E0.17-1.0毫克/毫升。
優選地，所述注射液中含總黃酮2.7-3.3毫克/毫升、紫丁香苷0.21-1.6毫克/毫升和刺五加苷E0.10-0.8毫克/毫升。
優選地，所述注射液中含總黃酮1.8-2.2毫克/毫升、紫丁香苷0.14-1.1毫克/毫升和刺五加苷E0.06-0.6毫克/毫升。
所述注射液的包裝材料為安瓿、輸液瓶、注射劑瓶、輸液袋或預灌封注射器等常用材料。
所述安瓿為中性硼矽玻璃安瓿、硼矽玻璃安瓿或低硼矽玻璃安瓿；
所述輸液瓶為鈉鈣玻璃輸液瓶、中性硼矽玻璃輸液瓶、低密度聚乙烯輸液瓶、聚丙烯輸液瓶、鈉鈣玻璃輸液瓶或硼矽玻璃輸液瓶；
所述注射劑瓶為高硼矽玻璃管制注射劑瓶、中性硼矽玻璃管制注射劑瓶、中性硼矽玻璃模製注射劑瓶、硼矽玻璃管制注射劑瓶、低硼矽玻璃管制注射劑瓶、鈉鈣玻璃模製注射劑瓶、硼矽玻璃模製注射劑瓶、低硼矽玻璃模製注射劑瓶或鈉鈣玻璃管制注射劑瓶；
所述輸液袋為三層共擠輸液用袋、五層共擠輸液用袋或多層共擠輸液用袋。
所述藥學上可接受的載體或稀釋劑是指藥學領域常規的藥物載體，選自填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、潤濕劑、溶劑、表面活性劑或矯味劑中的一種或幾種。
所述填充劑選自澱粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖等；
所述粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等；
所述崩解劑選自微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素或交聯羧甲基纖維素鈉；
所述潤滑劑選自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸鈣、碳酸氫鈉、微粉矽膠、滑石粉或硬脂酸鎂；
所述助懸劑選自微粉矽膠、蜂蠟、纖維素、固態聚乙二醇；
所述潤濕劑選自甘油、吐溫-80、乙氧基氫化蓖麻油或卵磷脂；
所述溶劑選自乙醇、液態聚乙二醇、異丙醇、吐溫-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油選自大豆油、蓖麻油、花生油、調和油等；
所述表面活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯（吐溫）等；
所述甜味劑選自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、檸檬酸或糖精鈉。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》還提供了上述注射液的製備方法、含量檢測方法和指紋圖譜檢查。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的製備方法包括以下步驟：
1）取含有總黃酮50-120毫克/克，紫丁香苷12.5-30毫克/克，刺五加苷E4-15毫克/克的刺五加組合物，加注射用水調整為每1毫升含總黃酮10-20毫克，用10％鹽酸調節pH值至4.0-5.5，攪拌均勻，經115-120攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏24小時以上，濾過，濾液再經115-120攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏24小時以上。
2）取上述溶液，濾過，加入0.2-0.3％的活性炭，煮沸20分鐘，冷卻至60攝氏度以下，濾過，濾液用20％氫氧化鈉溶液調節pH值至5.5-6.5，測定總黃酮的含量，加注射用水至全量，濾過，灌封，116攝氏度滅菌40分鐘，即得。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的含量檢測方法為：
1）總黃酮
以蘆丁為對照品，照分光光度法在波長510納米處測定吸收度，計算含量。
2）紫丁香苷和刺五加苷E
採用超高效液相色譜法，套用ACQUITY UPLC BEHC18（2.1×100毫米，1.7微米）色譜柱，柱溫為40攝氏度，流速為每分鐘0.3毫升，檢測波長為220納米，理論板數按紫丁香苷峰計算應不低於30000，刺五加苷E峰的分離度應達到1.5，梯度洗脫程式如下：0分鐘時，流動相為5％的乙腈和95％的體積比為0.1％的磷酸溶液；3.2分鐘時，流動相為9.2％的乙腈和90.8％的體積比為0.1％的磷酸溶液；10.0分鐘時，流動相為22％的乙腈和78％的體積比為0.1％的磷酸溶液；12.0分鐘時，流動相為100％的乙腈；15.0分鐘時，流動相為5％的乙腈和95％的體積比為0.1％的磷酸溶液。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的指紋圖譜檢測方法為：
採用高效液相色譜法，套用Agilent的Zorbox Eclipse XDB-C18（250×4.6毫米，5微米）色譜柱，柱溫為20攝氏度，流速為每分鐘0.8毫升，檢測波長為270納米，理論板數按紫丁香苷峰計算應不低於6000，且與附圖1中11、13號峰的分離度應達到1.5以上，梯度洗脫程式如下：流動相A為0.5％的甲酸溶液，流動相B為乙腈和水，其體積比為30∶70，0分鐘時為100％的流動相A；15分鐘時為88％的流動相A和12％的流動相B；21分鐘時為82％的流動相A和18％的流動相B；60分鐘時為31％的流動相A和69％的流動相B；65分鐘時為100％的流動相B；70-75分鐘時為100％的流動相A。
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》還提供了上述刺五加組合物或其製劑在製備治療內分泌系統疾病、心腦血管系統疾病、神經系統疾病、生殖系統疾病的藥物中的套用。
所述內分泌系統疾病為更年期綜合症或糖尿病，所述心腦血管系統疾病為短暫性腦缺血發作、腦動脈硬化、腦血栓形成、腦栓塞、冠心病、心絞痛或高脂血症，所述神經系統疾病為神經衰弱，所述生殖系統疾病為男性不育症。
改善效果
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的刺五加組合物、注射液及其檢測方法具有以下優點：
1、提取方法：與專利申請201010165556.8（簡稱2010年專利）相比，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的提取物的製備方法具有以下區別：
1）2010年專利中水提後醇沉，然後用石灰乳、硫酸調節pH值，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》的方法是將刺五加水提後，直接用石灰乳、硫酸調pH值。醇沉雖能去除部分雜質，但在除雜的同時，也包裹了部分有效成分，被一併去除，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》取消了醇沉步驟，降低了有效成分的損失。
2）煎煮時間不同，2010年專利每次煎煮時間為30-60分鐘，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》的煎煮時間為2-3小時。煎煮時間充足，有效成分尤其是刺五加苷E可充分溶解於水溶液中，提取收率可提高15％左右。
2、組合物：《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的組合物與2010年專利提供的提取物相比，具有有效成分含量高，尤其是刺五加苷E含量高，雜質少的優點。
3、注射液
1）注射液的製備方法：與07年（200710117640.0）、2010年（201010165556.8）專利相比，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的注射液的製備方法具有以下區別：
①2010年專利提取物用注射用水稀釋後直接進行滅菌，而《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》在滅菌前先調pH值至4.0-5.5，避免滅菌過程溶液pH值下降，導致含量下降。
②2010年專利熱處理冷藏、活性炭處理、再進行熱處理冷藏，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》連續進行2次熱處理冷藏後再進行活性炭處理。熱處理冷藏主要是為了去除粘液質等雜質，連續2次熱處理冷藏可徹底去除雜質，活性炭處理主要是為了脫色。2010年專利在活性炭處理前僅進行1次熱處理冷藏，不能保證粘液質等雜質徹底去除，在加活性炭過程中，容易使有效成分被雜質包裹一同除掉，導致有效成分損失增加。
③溶液灌裝後的滅菌溫度不同，07年專利及2010年專利均為115攝氏度30分鐘，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》為116攝氏度40分鐘，滅菌效果更優，產品質量更穩定。
2）注射液：《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的注射液與2010年專利提供的注射液相比，具有有效成分含量高，尤其是刺五加苷E含量高，雜質少，溶液顏色淺，質量穩定，套用安全等優點。
4、含量檢測方法：
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的紫丁香苷和刺五加苷E含量檢測方法為超高效液相色譜法，具有分離度好、速度快、靈敏度高等優點。分離度為普通方法的3倍，檢測時間由50分鐘縮短為15分鐘。
5、在藥效方面，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的組合物及注射液在降血糖、降血脂、男性不育症方面確有療效，效果優於2012年以前技術。
附圖說明
圖1：刺五加對照指紋圖譜。
圖中：共確定14個共有峰，基本上應在60分鐘內洗脫完全。其中12號峰為紫丁香苷峰，為指紋譜的參照峰。2、3、4、6、7、8、9、13、14號峰為刺五加藥材的共有峰，5、10號峰為刺五加注射液生產過程中轉化而成的物質，5號峰為5-羥甲基糠醛。
技術領域
《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》涉及醫藥發明領域，具體涉及一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法。
權利要求
1.一種刺五加組合物，其特徵在於，每克該組合物中含有總黃酮50-120毫克、紫丁香苷12.5-30毫克和刺五加苷E4-15毫克。
2.根據權利要求1所述的刺五加組合物，其特徵在於，每克該組合物中含有總黃酮60-120毫克、紫丁香苷15-30毫克和刺五加苷E6-15毫克。3.一種製備權利要求1或2所述的刺五加組合物的方法，其特徵在於，該方法包括以下步驟：
1）稱取刺五加，粉碎，加水浸泡30分鐘後煎煮2-3次，每次加入4-8倍量水，煎煮2-3小時，濾過；
2）待濾液溫度降到50攝氏度以下時，用20%石灰乳調節pH值至10.0-12.0，攪拌均勻；再用20%硫酸調節pH值至5.0-6.0，攪拌均勻，靜置4小時以上，濾取上清液，濃縮成在80攝氏度測定相對密度為1.10-1.20的濃縮膏；
3）待濃縮膏溫度降至50攝氏度以下時，邊攪拌邊加入乙醇使含醇量達83-85%，攪拌均勻，靜置12小時以上，濾過，濾液回收乙醇至無醇味並濃縮至在80攝氏度測定相對密度為1.15-1.20，即得。
4.含權利要求1或2所述的刺五加組合物的製劑，其特徵在於，所述製劑由刺五加組合物組成，或由刺五加組合物和藥學上可接受的載體或稀釋劑組成。
5.根據權利要求4所述的製劑，其特徵在於，所述製劑為注射液、凍乾粉針劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑或合劑。
6.根據權利要求5所述的製劑，其特徵在於，所述注射液中含總黃酮1.8-6.5毫克/毫升、紫丁香苷0.20-2.2毫克/毫升和刺五加苷E0.06-1.0毫克/毫升。
7.根據權利要求5所述的製劑，其特徵在於，所述注射液中含總黃酮1.8-6.5毫克/毫升、紫丁香苷0.22-2.2毫克/毫升和刺五加苷E0.10-1.0毫克/毫升。
8.根據權利要求6或7所述的製劑，其特徵在於，所述注射液的包裝材料為安瓿、輸液瓶、注射劑瓶、輸液袋或預灌封注射器。
9.一種製備權利要求6或7所述製劑的方法，其特徵在於，該方法包括以下步驟：
1）取刺五加組合物，加注射用水調整為每1毫升含總黃酮10-20毫克，用10%鹽酸調節pH值至4.0-5.5，攪拌均勻，經115-120攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏24小時以上，濾過，濾液再經115-120攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏24小時以上；
2）取上述溶液，濾過，加入0.2-0.3%的活性炭，煮沸20分鐘，冷卻至60攝氏度以下，濾過，濾液用20%氫氧化鈉溶液調節pH值至5.5-6.5，測定總黃酮的含量，加注射用水至全量，濾過，灌封，116攝氏度滅菌40分鐘，即得。
10.一種權利要求6或7所述製劑的含量檢測方法，包括總黃酮、紫丁香苷和刺五加苷E含量的檢測方法，其特徵在於，紫丁香苷和刺五加苷E含量的檢測方法，採用超高效液相色譜法，套用ACQUITYUPLCBEHC18色譜柱，柱溫為40攝氏度，流速為每分鐘0.3毫升，檢測波長為220納米，理論板數按紫丁香苷峰計算應不低於30000，刺五加苷E峰的分離度應達到1.5，梯度洗脫程式如下：0分鐘時，流動相為5%的乙腈和95%的體積比為0.1%的磷酸溶液；3.2分鐘時，流動相為9.2%的乙腈和90.8%的體積比為0.1%的磷酸溶液；10.0分鐘時，流動相為22%的乙腈和78%的體積比為0.1%的磷酸溶液；12.0分鐘時，流動相為100%的乙腈；15.0分鐘時，流動相為5%的乙腈和95%的體積比為0.1%的磷酸溶液。
11.一種權利要求6或7所述的製劑的定性檢測方法，包括指紋圖譜的檢測方法，其特徵在於，該指紋圖譜的檢測方法採用高效液相色譜法，套用Agilent的Zorbox Eclipse XDB-C18色譜柱，柱溫為20攝氏度，流速為每分鐘0.8毫升，檢測波長為270納米，理論板數按紫丁香苷峰計算應不低於6000，且與其相鄰的色譜峰的分離度應達到1.5以上，梯度洗脫程式如下：流動相A為0.5%的甲酸溶液，流動相B為乙腈和水，其體積比為30:70，0分鐘時為100%的流動相A；15分鐘時為88%的流動相A和12%的流動相B；21分鐘時為82%的流動相A和18%的流動相B；60分鐘時為31%的流動相A和69%的流動相B；65分鐘時為100%的流動相B；70-75分鐘時為100%的流動相A。
12.權利要求1或2所述的刺五加組合物或權利要求4-8任一項所述的製劑在製備治療內分泌系統疾病、心腦血管系統疾病、神經系統疾病或生殖系統疾病的藥物中的套用。
13.根據權利要求12所述的套用，其特徵在於，所述內分泌系統疾病為更年期綜合症或糖尿病，所述心腦血管系統疾病為短暫性腦缺血發作、腦動脈硬化、腦血栓形成、腦栓塞、冠心病、心絞痛或高脂血症，所述神經系統疾病為神經衰弱，所述生殖系統疾病為男性不育症。
實施方式
所述注射液的包裝材料為安瓿、輸液瓶、注射劑瓶、輸液袋或預灌封注射器等常用材料。
- 實施例1：刺五加組合物
1、提取方法：
1）取刺五加2000克，粉碎，加純化水煎煮2次，第一次加入6倍量純化水浸泡30分鐘後，煮沸3小時，第二次加入6倍量純化水煮沸2小時，濾過；
2）待濾液溫度降到50攝氏度時，用20％石灰乳調節pH值至11.0，充分攪拌；再用20％硫酸調節pH值至5.5，充分攪拌，靜置4小時，濾取上清液，濃縮成在80攝氏度測定相對密度為1.14的濃縮膏；
3）待濃縮膏溫度降至50攝氏度時，緩緩加入乙醇使含醇量達85％，充分攪拌，靜置12小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味並濃縮至在80攝氏度測定相對密度為1.15，即得（收率為8.86％）。
2、組合物的含量測定方法及結果：
1）測定方法：
①總黃酮
對照品溶液的製備：精密稱取在120攝氏度減壓乾燥至恆重的蘆丁對照品20毫克，置100毫升量瓶中，加60％乙醇適量，置80攝氏度水浴中加熱，使溶解，放冷，用60％乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取25毫升，置50毫升量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1毫升含無水蘆丁0.1毫克）。
標準曲線的製備：精密量取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0毫升，分別置10毫升量瓶中，加5％亞硝酸鈉溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，再加10％硝酸鋁溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，再加氫氧化鈉溶液（1摩爾/升）4毫升，用30％乙醇稀釋至刻度，放置10分鐘，照分光光度法（中國藥典2010年版一部附錄附錄VA），在510納米波長處測定吸收度，同時作空白，以吸收度為縱坐標，以濃度為橫坐標，繪製標準曲線。
測定法：取該品，用30％乙醇製成每1毫升約含總黃酮0.3毫克的溶液，作為供試品溶液，精密量取1毫升，置10毫升量瓶中，照標準曲線製備項下的方法，自“加5％亞硝酸鈉溶液0.3毫升”起，依法測定吸收度，計算，即得。
②紫丁香苷和刺五加苷E
照高效液相色譜法（中國藥典2010版附錄VID）測定。
色譜條件與系統適用性試驗：在超高效液相色譜（UPLC）上分析；套用ACQUITY UPLC BEHC18（2.1×100毫米，1.7微米）色譜柱；以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸溶液（V/V）為流動相B，按下表（表2）中的規定進行梯度洗脫；柱溫為40攝氏度；流速為每分鐘0.3毫升；檢測波長為220納米。理論板數按紫丁香苷峰計算應不低於30000；刺五加苷E峰的分離度應達到1.5。
時間（分鐘） | 流動相A（％） | 流動相B（％） |
0-3.2 | 5→9.2 | 95→90.8 |
3.2-10.0 | 9.2→22 | 90.8→78 |
10.0-12.0 | 100 | 0 |
12.0-15.0 | 5 | 95 |
對照品溶液的製備：取紫丁香苷對照品、刺五加苷E對照品適量，精密稱定，分別加50％甲醇製成每1毫升各含紫丁香苷40微克、刺五加苷E20微克的溶液，即得。
供試品溶液的製備：取該品適量，精密稱定，置10毫升量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2微升，注入液相色譜儀，測定，即得。
2）檢測結果：組合物中含總黃酮120毫克/克、紫丁香苷30毫克/克和刺五加苷E15毫克/克。
3、指紋圖譜檢查
照高效液相色譜法（2010年版中國藥典一部附錄VID）測定。
色譜條件與系統適用性試驗：色譜柱為Agilent的Zorbox Eclipse XDB-C18250×4.6毫米5μ液相色譜柱；流動相A：0.5％甲酸溶液，流動相B：乙腈-水（30∶70），梯度洗脫，時間程式見下表（表3）；檢測波長為270納米；柱溫20攝氏度；流速0.8毫升/分鐘。理論板數按紫丁香苷峰計算應不低於6000，且與其相鄰色譜峰的分離度應達到1.5以上。
時間（分鐘） | 流動相A（％） | 流動相B（％） |
0 | 100 | 0 |
15 | 88 | 12 |
21 | 82 | 18 |
60 | 31 | 69 |
65 | 0 | 100 |
70 | 100 | 0 |
75 | 100 | 0 |
參照物溶液的製備：取紫丁香苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1毫升含1.0毫克的溶液，即得。
供試品溶液的製備：取該品用0.45微米的微孔濾膜濾過，即得。
測定法：精密吸取供試品溶液、參照物溶液各10微升，分別注入液相色譜儀，測定。供試品色譜圖導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，與對照品指紋圖譜（即附圖1）比較，計算相似度，即得。
指紋圖譜檢查結果：供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.95。
- 實施例2：刺五加組合物
1、提取方法：
1）取刺五加2000克，粉碎，加純化水煎煮2次，第一次加入7倍量純化水浸泡30分鐘後，煮沸3小時，第二次加入5倍量純化水煮沸2小時，濾過；
2）待濾液溫度降到30攝氏度時，用20％石灰乳調節pH值至12.0，充分攪拌；再用20％硫酸調節pH值至5.0，充分攪拌，靜置6小時，濾取上清液，濃縮成在80攝氏度測定相對密度為1.10的濃縮膏；
3）待濃縮膏溫度降至30攝氏度時，緩緩加入乙醇使含醇量達83％，充分攪拌，靜置16小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味並濃縮至在80攝氏度測定相對密度為1.20，即得（收率為8.41％）。
2、組合物的含量檢測方法及結果：方法同實施例1，結果為：組合物中含總黃酮100毫克/克、紫丁香苷20毫克/克和刺五加苷E10毫克/克。
3、指紋圖譜檢查：
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.93。
- 實施例3：刺五加組合物
1、提取方法：
1）取刺五加2000克，粉碎，加純化水煎煮3次，第一次加入5倍量純化水浸泡30分鐘後，煮沸2小時，第二次加入5倍量純化水煮沸2小時，第三次加入4倍量純化水煮沸2小時，濾過；
2）待濾液溫度降到40攝氏度時，用20％石灰乳調節pH值至10.0，充分攪拌；再用20％硫酸調節pH值至6.0，充分攪拌，靜置8小時，濾取上清液，濃縮成在80攝氏度測定相對密度為1.20的濃縮膏；
3）待濃縮膏溫度降至40攝氏度時，緩緩加入乙醇使含醇量達84％，充分攪拌，靜置14小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味並濃縮至在80攝氏度測定相對密度為1.16，即得（收率為8.66％）。
2、組合物的含量檢測方法及結果：方法同實施例1，結果為：組合物中含總黃酮80毫克/克、紫丁香苷12.5毫克/克和刺五加苷E6毫克/克。
3、指紋圖譜檢查：
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.90。
- 實施例4：刺五加組合物
1、提取方法：
1）取刺五加2000克，粉碎，加純化水煎煮2次，第一次加入8倍量純化水浸泡30分鐘後，煮沸2小時，第二次加入4倍量純化水煮沸2小時，濾過；
2）待濾液溫度降到50攝氏度時，用20％石灰乳調節pH值至11.2，充分攪拌；再用20％硫酸調節pH值至5.6，充分攪拌，靜置4小時，濾取上清液，濃縮成在80攝氏度測定相對密度為1.13的濃縮膏；
3）待濃縮膏溫度降至50攝氏度時，緩緩加入乙醇使含醇量達85％，充分攪拌，靜置24小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味並濃縮至在80攝氏度測定相對密度為1.18，即得（收率為8.35％）。
2、組合物的含量檢測方法及結果：方法同實施例1，結果為：組合物中含總黃酮60毫克/克、紫丁香苷15毫克/克和刺五加苷E8毫克/克。
3、指紋圖譜檢查：
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.92。
- 實施例5：含刺五加組合物的小容量注射液（規格為：20毫升/支）
1、製備方法
1）取實施例1的刺五加組合物，加注射用水溶解並稀釋至每1毫升含總黃酮20毫克，用10％鹽酸調節pH值至5.0，充分攪拌，經115攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏24小時，濾過，濾液再經115攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏24小時。
2）取上述溶液，濾過，加入0.2％的活性炭，煮沸20分鐘，冷卻至60攝氏度以下，濾過，濾液用20％氫氧化鈉溶液調節pH值至6.0，測定總黃酮的含量，加注射用水至全量，濾過，每支裝20毫升，密封，116攝氏度滅菌40分鐘，即得。
2、注射液的含量檢測方法及結果
方法同實施例1，結果為：注射液中含總黃酮5.4毫克/毫升、紫丁香苷1.35毫克/毫升和刺五加苷E0.68毫克/毫升。
3、指紋圖譜檢查
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.97。
- 實施例6：含刺五加組合物的小容量注射液（規格為：20毫升/支）
1、製備方法
1）取實施例2的刺五加組合物，加注射用水溶解並稀釋至每1毫升含總黃酮10毫克，用10％鹽酸調節pH值至5.5，充分攪拌，經120攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏30小時，濾過，濾液再經120攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏24小時。
2）取上述溶液，濾過，加入0.3％的活性炭，煮沸20分鐘，冷卻至60攝氏度以下，濾過，濾液用20％氫氧化鈉溶液調節pH值至6.5，測定總黃酮的含量，加注射用水至全量，濾過，每支裝20毫升，密封，116攝氏度滅菌40分鐘，即得。
2、注射液的含量檢測方法及結果：
方法同實施例1，結果為：注射液中含總黃酮5.0毫克/毫升、紫丁香苷1.08毫克/毫升和刺五加苷E0.44毫克/毫升。
3、指紋圖譜檢查
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.95。
- 實施例7：含刺五加組合物的小容量注射液（規格為：20毫升/支）
1、製備方法
1）取實施例3的刺五加組合物，加注射用水溶解並稀釋至每1毫升含總黃酮20毫克，用10％鹽酸調節pH值至4.0，充分攪拌，經116攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏28小時，濾過，濾液再經116攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏28小時。
2）取上述溶液，濾過，加入0.2％的活性炭，煮沸20分鐘，冷卻至60攝氏度以下，濾過，濾液用20％氫氧化鈉溶液調節pH值至5.5，測定總黃酮的含量，加注射用水至全量，濾過，每支裝20毫升，密封，116攝氏度滅菌40分鐘，即得。
2、注射液的含量檢測方法及結果：
方法同實施例1，結果為：注射液中含總黃酮4.8毫克/毫升、紫丁香苷0.63毫克/毫升和刺五加苷E0.37毫克/毫升。
3、指紋圖譜檢查
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.96。
- 實施例8：含刺五加組合物的小容量注射液（規格為：20毫升/支）
1、製備方法
1）取實施例4的刺五加組合物，加注射用水溶解並稀釋至每1毫升含總黃酮10毫克，用10％鹽酸調節pH值至4.7，充分攪拌，經118攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏26小時，濾過，濾液再經118攝氏度高溫熱處理40分鐘，4攝氏度以下冷藏30小時。
2）取上述溶液，濾過，加入0.3％的活性炭，煮沸20分鐘，冷卻至60攝氏度以下，濾過，濾液用20％氫氧化鈉溶液調節pH值至5.8，測定總黃酮的含量，加注射用水至全量，濾過，每支裝20毫升，密封，116攝氏度滅菌40分鐘，即得。
2、注射液的含量檢測方法及結果
方法同實施例1，結果為：注射液中含總黃酮4.5毫克/毫升、紫丁香苷1.13毫克/毫升和刺五加苷E0.60毫克/毫升。
3、指紋圖譜檢查
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.95。
- 實施例9：含刺五加組合物的大容量注射液（規格為：100毫升/瓶）
1、製備方法
取實施例1的刺五加組合物，按實施例5方法製備，灌封時每瓶裝100毫升，116攝氏度滅菌40分鐘，即得。
2、注射液的含量檢測方法及結果
方法同實施例1，結果為：注射液中含總黃酮3.0毫克/毫升、紫丁香苷0.72毫克/毫升和刺五加苷E0.26毫克/毫升。
3、指紋圖譜檢查
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.95。
- 實施例10：含刺五加組合物的大容量注射液（規格為：250毫升/瓶）
1、製備方法
取實施例3的刺五加組合物，按實施例7方法製備，灌封時每瓶裝250毫升，116攝氏度滅菌40分鐘，即得。
2、注射液的含量檢測方法及結果
方法同實施例1，結果為：注射液中含總黃酮2.0毫克/毫升、紫丁香苷0.22毫克/毫升和刺五加苷E0.10毫克/毫升。
3、指紋圖譜檢查
檢查方法同實施例1，結果為供試品溶液的色譜圖具有刺五加對照指紋圖譜（附圖1）中的全部14個共有峰，且順序一致，相似度為0.96。
- 對比例1：參考中國專利申請200710117640.0年專利的實施例5
1、提取方法：取刺五加桿，切成1-3cm的碎片，煎煮2次，第一次加4倍量水煎煮40分鐘；第二次加8倍量的水煎煮60分鐘，合併煎液，濃縮至相對密度1.08（80攝氏度測），待溫度降低至40攝氏度時，加入乙醇使其含醇量達到75％，攪拌均勻後靜置18小時，過濾，殘渣加乙醇使含醇量達到85％，靜置12小時，過濾，殘渣離心過濾，收集濾液，回收乙醇至無醇味，得濃浸膏，補加純化水至濃浸膏18倍體積，攪拌均勻，待溫度將至50攝氏度以下，加10％新鮮石灰乳，調pH值至12.00，攪拌均勻後，再用10％硫酸調節pH值至6.5，繼續攪拌10分鐘後，冷卻至室溫，靜置6小時，抽取上清液過濾，減壓濃縮至相對密度1.17（80攝氏度），待溫度降至40攝氏度以下時，緩慢加入乙醇使含醇量達82％，沉澱36小時，取上清液過濾，殘渣離心過濾，回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.08（80攝氏度），加入注射用水稀釋至5克（生藥）/毫升，115攝氏度滅菌40分鐘，與-15攝氏度下冷凍16小時，緩化，冷藏10天，藥液經0.45微米濾膜過濾，濃縮減壓乾燥即得刺五加提取物（收率為6.72％）。
2、注射液製備方法：
取刺五加提取物，加注射用水使溶解，用40％的NaOH溶液調pH值至5.5，攪拌均勻後加熱，加入0.2％的活性炭，煮沸吸附15分鐘，冷卻至50攝氏度以下用40％的NaOH溶液調pH值至5.7，補加新鮮注射用水至含生藥5克/毫升。經0.45微米濾膜過濾至澄清，灌裝，115攝氏度高壓滅菌40分鐘。冷凍，緩化後冷藏20天，常溫放置3.5個月。0.65微米濾芯過濾，加注射用水至含生藥5克/毫升，調pH值至5.0，加入活性炭脫色，過濾，調pH值至5.0，補加注射用水至含生藥5克/毫升，分別經0.45微米、0.22微米濾芯精濾，灌封，115攝氏度30分鐘滅菌，即得。
3、提取物及注射液的含量測定方法及結果：檢測方法同實施例1，結果：
提取物中含總黃酮46.2毫克/克、紫丁香苷10.96毫克/克和刺五加苷E0.56毫克/克；
注射液中含總黃酮4.9毫克/毫升、紫丁香苷1.28毫克/毫升和刺五加苷E0.04毫克/毫升。
- 對比例2：中國專利申請201010165556.8的實施例5
1、提取方法：取刺五加桿切成碎片，加水煎煮3次，第一次加5倍量水，煎煮30分鐘；第二次加6倍量水，煎煮40分鐘，第三次加4倍量的水，煎煮30分鐘，合併煎液，減壓濃縮至相對密度為1.11（80攝氏度），加入乙醇至含醇量75％，靜置濾過，回收乙醇後加水稀釋至生藥重量的4倍，用重量百分比為20％的石灰乳調pH值至11.0，再用重量百分比為20％的硫酸將pH值調至5.1，靜置過濾，濃縮至80攝氏度時相對密度為1.13，再次加入乙醇使含醇量達84％，靜置過濾，離心分離雜質，藥液回收乙醇後濃縮乾燥，即得刺五加提取物（收率為7.23％）。
2、注射液：取刺五加提取物100克，加入注射用水稀釋，100-120攝氏度熱處理，過濾，0-4攝氏度冷藏處理，過濾，調節pH值至5.5，活性炭處理，過濾，滅菌，冷藏處理，超濾，灌裝，滅菌即得。
3、含量測定：檢測方法同實施例1，結果：
提取物中含總黃酮44.5毫克/克、紫丁香苷6.02毫克/克和刺五加苷E0.46毫克/克；
注射液中含總黃酮5.1毫克/毫升、紫丁香苷0.55毫克/毫升和刺五加苷E0.03毫克/毫升。
- 實驗例1：含量的測定
1、對實施例1-4的刺五加組合物，對比例1、2的提取物進行含量測定，方法同實施例1，結果見表4：
收率（％） | 總黃酮（毫克/克） | 紫丁香苷（毫克/克） | 刺五加苷E（毫克/克） | |
實施例1 | 8.86 | 120 | 30 | 15 |
實施例2 | 8.41 | 100 | 20 | 10 |
實施例3 | 8.66 | 80 | 12.5 | 6 |
實施例4 | 8.35 | 60 | 15 | 8 |
對比例1 | 6.72 | 46.2 | 10.96 | 0.56 |
對比例2 | 7.23 | 44.5 | 6.02 | 0.46 |
表4結果顯示：與對比例1、2相比，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的刺五加組合物中的總黃酮、紫丁香苷、刺五加苷E的含量及收率均增加。
2、對實施例5-10的含刺五加組合物的注射液、對比例1、2的注射液進行含量測定，方法同實施例1，結果見表5：
/ | 總黃酮（毫克/毫升） | 紫丁香苷（毫克/毫升） | 刺五加苷E（毫克/毫升） |
實施例5 | 5.4 | 1.35 | 0.68 |
實施例6 | 5.0 | 1.08 | 0.44 |
實施例7 | 4.8 | 0.63 | 0.37 |
實施例8 | 4.5 | 1.13 | 0.60 |
實施例9 | 3.0 | 0.72 | 0.26 |
實施例10 | 2.0 | 0.22 | 0.10 |
對比例1 | 4.9 | 1.28 | 0.04 |
對比例2 | 5.1 | 0.55 | 0.03 |
表5結果顯示：與對比例1、2相比，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的注射液中刺五加苷E的含量較高。
為了進一步驗證《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》的刺五加組合物和製劑的藥效，進行了如下藥效實驗：
- 實驗例2：對四氧嘧啶所致小鼠血糖升高的影響
1、實驗動物：昆明種小鼠，體重18-22克，雌雄各半。
2、實驗試劑：四氧嘧啶，購自Sigma公司。
3、實驗分組：空白對照組、模型組、實施例1組、實施例2組、實施例3組、實施例4組、對比例1組、對比例2組。
4、實驗方法
4.1模型製備
將四氧嘧啶用生理鹽水配成2％水溶液（現用現配）。
取昆明種小鼠，雌雄各半，按四氧嘧啶溶液50毫克/千克的劑量，對禁食12小時後的小鼠進行尾靜脈注射。連續飼養3天后，禁食12小時，眼眶採血，分離血清，測定空腹血糖，以血糖大於14毫摩爾/升作為糖尿病模型小鼠。
4.2分組給藥
取糖尿病模型小鼠70隻，雌雄各半，隨機分為7組，每組10隻，分別為實施例1-4組、對比例1、2組和模型組；另取重量相近正常昆明種小鼠10，雌雄各半，作為空白對照組。實施例1-4組、對比例1、2組分別灌胃給予實施例1-4的刺五加組合物、對比例1、2的提取物，劑量均為1.0克生藥量/千克，模型組和空白對照組分別按照15毫升/千克體重灌胃給予同體積的生理鹽水。連續灌胃15天，每天觀察小鼠外貌特徵的改變。
試驗結束後對試驗動物禁食12小時，眼眶靜脈叢採血，測定空腹血糖。
5、統計學處理：進行組間t檢驗。
6、實驗結果：
6.1一般觀察：在試驗結束後，四氧嘧啶模型組動物有明顯多飲、多尿、體型消瘦、毛髮失去光澤、蜷臥弓背沒精神等現象。而空白對照組動物精神狀況良好，毛髮光澤，生長發育正常。實施例1-4組動物外貌特徵得到顯著改善，對比例1、2組動物外貌特徵有所改善。
6.2血糖值的改變：見表6
組別 | 血糖值 |
空白對照組 | 6.45±0.64 |
模型組 | 20.12±1.28 |
實施例1組 | 13.93±0.95 |
實施例2組 | 14.22±0.80 |
實施例3組 | 14.61±0.69 |
實施例4組 | 14.09±0.54 |
對比例1組 | 17.86±0.73 |
對比例2組 | 18.01±0.88 |
註：與模型組相比，P＜0.05，P＜0.01；與對比例1組相比，P＜0.05；與對比例2組相比，P＜0.05。
表6結果顯示：實施例1-4組血糖濃度與四氧嘧啶模型組比較有極顯著差異（p＜0.01），對比例1、2組與四氧嘧啶模型組比較有顯著差異（p＜0.05）。實施例1-4組血糖濃度與對比例1、2組比較有顯著性差異（p＜0.05）。
結果表明，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》製備的刺五加組合物具有顯著的降糖作用，效果優於200710117640.0產品和201010165556.8產品。
- 實驗例3：對高脂血症的影響
1、基本資料
入選患者120例，清晨空腹血脂符合下列標準之一：甘油三酯（TG）≥1.70毫摩爾/升；總膽固醇（TC）≥5.20毫摩爾/升。有嚴重內分泌、肝腎疾病及家族性純合子高膽固醇血症，近3個月內發生過心腦血管病，難以控制的高血壓患者除外。120例患者中，男59例，女61例，年齡45-77歲，平均年齡58歲。高TC血症20例，高TG血症35例，混合型高脂血症65例。低密度脂蛋白（LDL-C）≥3.60毫摩爾/升者90例，高密度脂蛋白（HDL-C）≤1.00毫摩爾/升者30例。
2、方法
2.1治療方法：入選病例常規低脂膳食，隨機分為3組，觀察組40例，男18例，女22例；對照1組40例，男21例，女19例；對照2組40例，男20例，女20例。觀察組用實施例6樣品，對照1組用對比例1的刺五加注射液，對照2組用對比例2的刺五加注射液，分別取100毫升，加入到5％葡萄糖注射液250毫升中，靜脈滴注，每天1次，連續10天為一個療程，停藥5天后再用下一個療程，連續使用三個療程。
2.2血脂測定：試驗結束後測定血脂水平。取血前1晚禁止飲酒及高脂飲食，空腹12小時以上取靜脈血，及時分離血清。
2.3療效評定標準：按衛生部1998年頒發的心血管藥物臨床研究指導原則進行判定。
治療後與治療前比較：
顯效：TC下降≥20％，TG下降≥20％，HDL-C上升≥0.26毫摩爾/升，TC-HDL-C/HDL-C下降≥20％；
有效：TC下降達10％-20％，TG下降達20％-40％，HDL-C上升達0.18-0.26毫摩爾/升，TC-HDL-C/HDL-C下降10％-20％；
未達到有效標準為無效；
惡化：TC上升≥10％，TG上升≥10％，HDL-C下降0.18毫摩爾/升，TC-HDL-C/HDL-C升高≥10％。
3、統計方法：均採用SPSS11.0統計軟體處理。
4、結果：見表7
表7：治療前後血脂變化情況 
註：與治療前相比，P＜0.01；與對照組相比，P＜0.05。
表7結果顯示：與治療前相比，觀察組的總膽固醇、低密度脂蛋白、TC-HDL-C/HDL-C的含量顯著減少（P＜0.01），甘油三酯含量明顯減少（P＜0.05），高密度脂蛋白的含量明顯增加（P＜0.05），對照1、2組的總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量明顯減少（P＜0.05）；與對照1、2組相比，觀察組的總膽固醇、低密度脂蛋白和TC-HDL-C/HDL-C的含量明顯減少（p＜0.05）。
觀察組對TC、TG、HDL-C治療的總有效率為90.1％，對照1組的總有效率為86.7％，對照2組的總有效率為85.6％。
同樣對其他實施例進行實驗，結果也與上述結果類似。
說明：《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》的刺五加組合物及其製劑可以明顯的降低血脂，效果優於200710117640.0產品和201010165556.8產品。
- 實驗例4：對小鼠睪丸的作用
1、實驗動物：昆明種小鼠，體重18-22克，雄性。
2、實驗分組：空白對照組、實施例1組、實施例2組、實施例3組、實施例4組、對比例1組、對比例2組。
3、試驗方法：實施例1-4組給予實施例5-8的含刺五加組合物的製劑樣品，對比例1、2組分別給予對比例1、2注射液，各組給藥劑量均為0.2毫升。空白對照組給予等體積的生理鹽水。每日腹腔注射一次，連續給藥30天，於末次給藥次日經頸椎脫臼處死小鼠，稱體重，剖取雙側睪丸並稱重，隨機將每組動物左側或右側睪丸作常規石蠟切片，H.E染色後作鏡檢觀察。
4、統計學處理
進行組間t檢驗。
5、結果
5.1對體重及睪丸重量的影響：見表8。
表8：對體重及睪丸重量的影響 
註：實驗後與實驗前相比，P＜0.05；與空白對照組相比，P＜0.05，P＜0.01。
表8結果顯示，空白對照組小鼠體重實驗後比實驗前增加了20.4％，實施例1-4組和對比例1、2組小鼠體重實驗後比實驗前分別平均增加了34.6％和33.6％。對比例1、2組和實施例1-4組與空白對照組比較，體重增加明顯，但無顯著性差異。
對比例1、2組小鼠睪丸重量平均增加了18.2％，與空白對照組比較有顯著性差異（p＜0.05），實施例1-4組小鼠睪丸重量平均增加了30.7％，與空白對照組比較有極顯著性差異（p＜0.01）。
5.2對小鼠睪丸曲細精管直徑的影響：見表9。
組別 | 曲細精管直徑 |
空白對照組 | 88.6±5.4 |
實施例1組 | 110.2±6.3 |
實施例2組 | 109.8±5.7 |
實施例3組 | 110.0±6.5 |
實施例4組 | 108.5±7.0 |
對比例1組 | 104.2±6.1 |
對比例2組 | 104.5±6.8 |
註：與空白對照組相比，P＜0.05，P＜0.01。
表9結果顯示，對比例1、2組和實施例1-4組小鼠睪丸曲細精管直徑與空白對照組比較，也有明顯增加，對比例1、2組平均增加17.6％，具有顯著性差異（p＜0.05），實施例1-4組平均增加23.8％，具有極顯著性差異（p＜0.01）。
5.3組織學觀察：光鏡下觀察小鼠睪丸切片，各組曲細精管的組織結構均正常，均有正常精子產生。實施例1-4組的曲細精管比對照組更粗，管壁生精細胞的層數更多。
結果證實：《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》提供的刺五加組合物及其製劑可以治療男性不育症，效果優於200710117640.0產品和201010165556.8產品。
榮譽表彰
2018年12月20日，《一種刺五加組合物，含其製劑及其檢測方法》獲得第二十屆中國專利優秀獎。
