《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》是廣東省九江酒廠有限公司於2011年9月20日申請的專利，該專利的申請號為2011102788595，公布號為CN102559519A，授權公布日為2012年7月11日，發明人是吳雪梅、何松貴、余劍霞。
《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》公開了一種產酯酵母以及一種用該產酯酵母同時高產乙酸乙酯和酒精的方法，獲得的齋酒酯香突出、舒適且酒體更豐滿。該發明是一種工藝簡單、成本低廉的白酒增香提產生產工藝，生產的齋酒質量及出酒率均高於日常生產齋酒。
2016年12月7日，《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》獲得第十八屆中國專利優秀獎。
基本介紹
- 中文名：一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法
- 公布號：CN102559519A
- 授權日：2012年7月11日
- 申請號：2011102788595
- 申請日：2011年9月20日
- 申請人：廣東省九江酒廠有限公司
- 地址：廣東省佛山市南海區九江鎮
- 發明人：吳雪梅、何松貴、余劍霞
- Int.Cl.：C12N1/16(2006.01)I；C12G3/02(2006.01)I；C12G3/12(2006.01)I
- 代理機構：廣州三環專利代理有限公司
- 代理人：溫旭
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
2011年9月前，中國國家對白酒產業政策進行調整，嚴禁在成品酒中添加香味成分以豐富酒體，鼓勵酒廠通過發酵過程的調控來增加酒體香味成分，而釀酒工業，尤其是廣大清香型、豉香型小曲和生料釀酒企業，由於技術落後，在發酵中很難提高酒中香味成分的含量。
小曲米酒中的呈香呈味物質含量較少，口味淡薄，與固態發酵酒相比豐滿度及放香不足；採用生物技術方法提高齋酒的總酯、總酸、β-苯乙醇的含量，可提高小曲白酒的豐滿度及放香，進而提高小曲白酒的質量，使生產的小曲白酒成為高檔白酒。
選用產酯、酸、β-苯乙醇能力強的酵母菌種並設法套用於白酒生產工藝是提高白酒呈香呈味物質含量的有效途徑之一。
發明內容
專利目的
《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》的目的是提供一株產酯酵母JJJC-2。該發明的另一目的是提供一種利用上述產酯酵母同時高產乙酸乙酯和酒精的方法。
技術方案
《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》提供的產酯酵母JJJC-2是從酒麴中分離純化獲得的，產酯酵母JJJC-2（釀酒酵母Saccharomyces cerevisiaeJJJC-2）已於2011年9月9日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（其簡稱為CGMCC），地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCCNo：5232。
產酯酵母JJJC-2（CGMCCNo：5232）為橢圓形，菌落扁平、無光澤、乳白色、邊緣整齊。最適生長溫度為28-32℃，最適生長pH為5.0-6.0.
為實現《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》另一目的，該發明採取以下設計方案：
一種同時生產乙酸乙酯和酒精的方法，包括以下步驟：
1）將產酯酵母JJJC-2接種於總還原糖濃度為80-400克/升，含10-50克/升乙醇和1-3克/升乙酸，1克/升磷酸二氫鉀，pH為4.5-6.5的發酵培養基中，25-35℃條件下攪拌培養72-120小時。
2）將得到的發酵液與小曲米酒發酵成熟的醪液以1:30的比例混合串蒸。
獲得的齋酒（30％v/v）的乙酸乙酯達到3.0-3.2克/升，出酒率明顯提高。
串蒸過程中，初蒸時汽壓不得超過0.4兆帕，流酒時保持0.10-0.15兆帕，流酒溫度應在30℃以下。
獲得的齋酒（30％v/v）酯香突出、舒適且酒體更豐滿。這是一種工藝簡單、成本低廉的白酒增香增產生產工藝，生產的齋酒質量及出酒率均高於日常生產齋酒。
在上述過程中，所述菌種的量為2-20％（體積比），指接種種子液的量占發酵培養基和種子液的體積（接種種子液與發酵培養基的體積比），其中最優選的是5％。
齋酒可稱為剛蒸餾出來的新酒。把剛蒸餾出來的新酒混勻，取100毫升裝入100毫升量筒，用溫度計測酒溫，用酒度計測酒度，通過查換算表把測得的酒度換算成酒溫20℃時的酒度，要求換算後新蒸餾出來的新酒的酒度為30％V/V，即要求一邊蒸餾一邊作線上測量。直至全部剛蒸餾出來的新酒的換算成酒溫20℃時的酒度為30％V/V時，停止收酒。
所述培養基的還原糖為大米澱粉糖化液、大麥澱粉糖化液。
所述的發酵培養基的pH值為4.5-6.5，優選為5.5。
所述的發酵培養條件優選為28-32℃攪拌培養80小時。
為了使發酵的效果較好，所述接種的產酯酵母JJJC-2在接種之前，應將斜面培養的菌種活化，培養成液體菌種，液體菌種經過至少二級種子培養後，接種到發酵培養基中進行發酵培養。
所述的斜面菌種是將產酯酵母JJJC-2接種於總糖含量為20-120克/升的麥芽汁固體斜面上，在25-35℃條件下培養30-72小時後，放入4℃冰櫃保存。
所述的液體菌種是將保存的產酯酵母JJJC-2菌種活化後，接種一環細胞於裝有100毫升總糖含量為80-160克/升的麥芽汁或米曲汁液體培養基的三角瓶中，於25-35℃條件下攪拌培養16-22小時，即為液體菌種。
所述的至少二級液體種子培養是指：一級液體種子培養，是將液體菌種按5-15％的接種量，即培養基體積的5-15％，接入裝有200毫升，總糖含量為80-160克/升的糖化液的三角瓶中，於25-35℃條件下攪拌培養16-22小時，即為一級液體種子培養物；所述二級液體種子培養，是將一級種子培養液按5-15％的接種量，即培養基體積的5-15％，接入裝有300升，總糖含量為80-160克/升的糖化液的種子培養罐，在25-35℃條件下攪拌培養16-22小時，即為二級液體種子培養物。
改善效果
《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》使用的發酵底物是普通的麥芽汁、大米澱粉糖化液，只需要調節其還原糖總含量，適當添加乙醇、乙酸、磷酸二氫鉀，即可進行正常生產，方法簡單，生產投資較少。
《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》的方法生產的乙酸乙酯和酒精與成熟發酵醪液串蒸後獲得的齋酒，既提高了乙酸乙酯的含量又提高了出酒率，獲得的齋酒的乙酸乙酯、總酯、乙酸、β-苯乙醇含量高，酯香突出、酒體更豐滿。該發明的方法實用性強，操作簡便，易於推廣。由於一次發酵同時獲得乙酸乙酯和酒精兩個產品，所以投資少、見效快、效益高，具有很強的市場競爭力。
色譜檢測方法為：氣相色譜儀（Agilent6890），色譜柱（HP19095F123（J&WScientific）），內標（乙酸正戊酯，2-乙基正丁酸），GC-F1D條件：HP-FFAP（30米長，0.53毫米內徑，1.0微米膜厚），載氣：高純氮，分流模式：不分流，升溫程式：35℃保持3.5分鐘，再以10℃/分鐘升溫至110℃保持1分鐘，然後以12℃/分鐘升溫至200℃保持3分鐘；檢測器：300℃，進樣口：250℃。
技術領域
《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》涉及微生物發酵領域，具體涉及一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法。
權利要求
1.產酯酵母JJJC-2（Saccharomyces cerevisiae），其保藏號為CGMCCNO：5232。
2.一種利用權利要求1所述的產酯酵母生產乙酸乙酯和酒精的方法，具體包括以下步驟：菌種斜面培養，活化後培養成液體菌種，液體菌種經過至少二級液體種子培養後，接種到發酵培養基中進行發酵培養；所述的菌種斜面培養是指將產酯酵母JJJC-2菌種接種於總糖含量為20-120克/升的麥芽汁固體斜面上，在25-35℃條件下培養30-72小時後，放入4℃冰櫃保存；所述的液體菌種是將保存的產酯酵母JJJC-2菌種活化後，接一環細胞於裝有100毫升總糖含量為80-160克/升的麥芽汁或米曲汁液體培養基的三角瓶中，於25-35℃條件下攪拌培養16-22小時，即為液體菌種；所述至少二級液體種子培養是指：一級液體種子培養，是將液體菌種按5-15％的接種量，即培養基體積的5-15％，接入裝有200毫升，總糖含量為80-160克/升的糖化液的三角瓶中，於25-35℃條件下攪拌培養16-22小時，即為一級液體種子培養物；所述二級液體種子培養，是將一級種子培養液按5-15％的接種量，即培養基體積的5-15％，接入裝有300升，總糖含量為80-160克/升的糖化液的種子培養罐，在25-35℃條件下攪拌培養16-22小時，即為二級液體種子培養物；
所述發酵培養的步驟為：
1）將所述酵母JJJC-2接種於總還原糖濃度為150-400克/升，含10-50克/升乙醇和1-3克/升乙酸，1克/升磷酸二氫鉀，pH為4.5-6.5的發酵培養基中，25-35℃條件下攪拌培養72-120小時；
2）將得到的發酵液與小曲米酒發酵成熟的醪液以1:30的比例混合串蒸。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於：所述所述發酵培養的步驟中，菌種的接種量為2％-20％，指接種種子液的量占發酵培養基和種子液的體積。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於：所述菌種的接種量為5％。
5.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於：所述培養基的還原糖為大米澱粉糖化液或大麥澱粉糖化液。
6.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於：所述的發酵培養基的pH值為5.5。
實施方式
實施例1
利用產酯酵母JJJC-2發酵生產乙酸乙酯和酒精，步驟如下：
1）斜面菌種：將產酯酵母JJJC-2菌種接種於含有總糖含量為60克/升的麥芽汁固體斜面上，在28℃條件下培養48小時後，放入4℃冰櫃保存；
2）液體菌種：將保存的產酯酵母JJJC-2斜面菌種活化後，接一環細胞於裝有100毫升，總糖含量為120克/升的麥芽汁液體培養基的三角瓶中，於30℃條件下攪拌培養20小時，即為液體菌種；
3）一級液體種子培養：將液體菌種按5％的接種量接入裝有200毫升，總糖含量為120克/升的大米澱粉糖化液三角瓶中，於30℃條件下攪拌培養18小時，得到一級液體種子培養物；
4）二級液體種子培養：將一級種子培養液按5％的接種量接入裝有300升，總糖含量為120克/升的大米澱粉糖化液種子罐，在30℃條件下攪拌培養18小時，得到二級液體種子培養物；
5）發酵培養基的製備：培養基是總還原糖濃度為200克/升的大米澱粉糖化液，添加20克/升乙醇、2克/升乙酸、1克/升磷酸二氫鉀，培養基的pH為5.5。
6）發酵罐發酵：將二級種子培養液按5％的接種量接入裝有1000升上一步配製的總糖含量為200克/升的大米澱粉糖化液培養基中，在30℃條件下攪拌培養80小時；
7）將得到的發酵液與小曲米酒發酵成熟的醪液以1:30的比例混合串蒸，獲得既提高了乙酸乙酯含量且提高了出酒率的（30％v/v）齋酒。試驗對比數據如下表：
樣品名稱 | 乙酸乙酯（克/升） | 總酯（克/升） | 乙酸（克/升） | 出酒量（升） |
日常齋酒 | 1.217 | 1.876 | 0.50 | 422 |
該發明齋酒 | 3.186 | 3.795 | 0.62 | 495 |
註：1.表中齋酒酒度均為30％v/v。2.表中數據為小曲米酒的齋酒數據。
2.日常齋酒是指發酵成熟的醪液直接蒸餾，與《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》齋酒的不同點只在於沒有添加該發明生產的發酵液與其串蒸，蒸餾方法相同。
實施例2
利用產酯酵母JJJC-2發酵生產乙酸乙酯和酒精，步驟如下：
1）斜面JJJC-2在30℃條件下培養36小時後，放入4℃冰櫃保存；
2）液體菌種：將保存的產酯酵母JJJC-2斜面菌種活化後，接一環細胞於裝有100毫升，總糖含量為160克/升的麥芽汁液體培養基的三角瓶中，於30℃條件下攪拌培養20小時，即為液體菌種；
3）一級液體種子培養：將液體菌種按10％的接種量接入裝有200毫升，總糖含量為160克/升的大米澱粉糖化液三角瓶中，於30℃條件下攪拌培養20小時，得到一級液體種子培養物；
4）二級液體種子培養：將一級種子培養液按10％的接種量接入裝有300升，總糖含量為160克/升的大米澱粉糖化液種子罐，在30℃條件下攪拌培養20小時，得到二級液體種子培養物；
5）三級液體種子培養：將二級種子培養液按10％的接種量接入裝有3000升，總糖含量為160克/升的大米澱粉糖化液種子罐，在30℃條件下攪拌培養20小時，得到三級液體種子培養物；
6）發酵培養基的製備：培養基是總還原糖濃度為300克/升的大米澱粉糖化液，添加30克/升乙醇、1克/升乙酸、1克/升磷酸二氫鉀，培養基的pH為6.0。
7）發酵罐發酵：將三級種子培養液按15％的接種量接入裝有1000升上一步配製的總糖含量為300克/升的大米澱粉糖化液培養基中，在30℃條件下攪拌培養72小時；
8）將得到的發酵液與小曲米酒發酵成熟的醪液以1:30的比例混合串蒸，獲得既提高了乙酸乙酯含量且提高了出酒率的（52％v/v）齋酒。試驗對比數據如下表：
樣品名稱 | 乙酸乙酯（克/升） | 總酯（克/升） | 乙酸（克/升） | β-苯乙醇（毫克/升） | 出酒量（升） |
日常齋酒 | 2.072 | 0.876 | 0.489 | 56.55 | 78 |
該發明齋酒 | 4.94. | 6.526 | 0.597 | 68.25 | 88 |
註：1.表中齋酒酒度均為52％v/v。2.表中數據為小曲米酒的齋酒數據。
從上表數據可知，串蒸（52％v/v）齋酒的乙酸乙酯、總酯、乙酸、β-苯乙醇、出酒量與日常齋酒相比均得到明顯提高。
實施例3
利用產酯酵母JJJC-2發酵生產乙酸乙酯和酒精，步驟如下：
1）斜面菌種：將產酯酵母JJJC-2菌種接種於含有總糖含量為20克/升的麥芽汁固體斜面上，在25℃條件下培養30小時後，放入4℃冰櫃保存；
2）液體菌種：將保存的產酯酵母JJJC-2斜面菌種活化後，接一環細胞於裝有100毫升，總糖含量為80克/升的麥芽汁液體培養基的三角瓶中，於25℃條件下攪拌培養16小時，即為液體菌種；
3）一級液體種子培養：將液體菌種按8％的接種量接入裝有200毫升，總糖含量為80克/升的大麥澱粉糖化液三角瓶中，於25℃條件下攪拌培養16小時，得到一級液體種子培養物；
4）二級液體種子培養：將一級種子培養液按8％的接種量接入裝有300升，總糖含量為80克/升％的大麥澱粉糖化液種子罐，在25℃條件下攪拌培養16小時，得到二級液體種子培養物；
5）發酵培養基的製備：培養基是總還原糖濃度為150克/升的大麥澱粉糖化液，添加1％乙醇、0.1％乙酸、0.1％磷酸二氫鉀，培養基的pH為4.5；
6）發酵罐發酵：將二級種子培養液按10％的接種量接入裝有1000升上一步配製的總糖含量為150克/升的大麥澱粉糖化液培養基中，在25條件下攪拌培養100小時；
7）將得到的發酵液與小曲米酒發酵成熟的醪液以1:30的比例混合串蒸，獲得既提高了乙酸乙酯含量且提高了出酒率的（30％v/v）齋酒。試驗對比數據如下表：
樣品名稱 | 乙酸乙酯（克/升） | 總酯（克/升） | 乙酸（克/升） | 出酒量（升） |
日常齋酒 | 1.217 | 1.876 | 0.50 | 422 |
串蒸齋酒 | 3.152 | 3.613 | 0.56 | 471 |
註：1.表中齋酒酒度均為30％v/v。2.表中數據為小曲米酒的齋酒數據。
實施例4
利用產酯酵母JJJC-2發酵生產乙酸乙酯和酒精，步驟如下：
1）斜面菌種：將產酯酵母JJJC-2菌種接種於含有總糖含量為100克/升的麥芽汁固體斜面上，在35℃條件下培養72小時後，放入4℃冰櫃保存；
2）液體菌種：將保存的產酯酵母JJJC-2斜面菌種活化後，接一環細胞於裝有100毫升，總糖含量為140克/升％的麥芽汁液體培養基的三角瓶中，於35℃條件下攪拌培養22小時，即為液體菌種；
3）一級液體種子培養：將液體菌種按15％的接種量接入裝有200毫升，總糖含量為140克/升的大米澱粉糖化液三角瓶中，於35℃條件下攪拌培養22小時，得到一級液體種子培養物；
4）二級液體種子培養：將一級種子培養液按15％的接種量接入裝有300升，總糖含量為140克/升的大米澱粉糖化液種子罐，在35℃條件下攪拌培養22小時，得到二級液體種子培養物；
5）三級液體種子培養：將二級種子培養液按15％的接種量接入裝有3000升，總糖含量為140克/升的大米澱粉糖化液種子罐，在35℃條件下攪拌培養22小時，得到三級液體種子培養物；
6）發酵培養基的製備：培養基是總還原糖濃度為400克/升的大米澱粉糖化液，添加5％乙醇、0.3％乙酸、0.1％磷酸二氫鉀，培養基的pH為6.5；
7）發酵罐發酵：將三級種子培養液按8％的接種量接入裝有1000升上一步配製的總糖含量為400克/升的大米澱粉糖化液培養基中，在35℃條件下攪拌培養120小時；
8）將得到的發酵液與發酵成熟的醪液以1:30的比例混合串蒸，獲得既提高了乙酸乙酯含量且提高了出酒率的（52％v/v）齋酒。試驗對比數據如下表：
樣品名稱 | 乙酸乙酯（克/升） | 總酯（克/升） | 乙酸（克/升） | β-苯乙醇（毫克/升） | 出酒量（升） |
日常齋酒 | 2.072 | 3.867 | 0.489 | 56.55 | 78 |
串蒸齋酒 | 4.522 | 6.017 | 0.561 | 67.75 | 84 |
註：1.表中齋酒酒度均為52％v/v。2.表中數據為小曲米酒的齋酒數據。
從上表數據可知，串蒸（52％v/v）齋酒的乙酸乙酯、總酯、乙酸、β-苯乙醇、出酒量與日常齋酒相比均得到明顯提高。
實施例5
1.酒麴的原料、製作、成曲：
（1）原料配比：大米100千克，大豆20千克，餅泥20千克，餅葉10千克，曲母2千克。
（2）蒸料、制坯、培曲：大米加水量為80％-85％，用蒸汽蒸煮至米飯熟度為75％-80％即可；大豆採用常壓蒸煮16-20小時，務必熟透。將米飯冷卻至36℃左右，加入經冷卻的熟大豆後，再加入餅泥、餅葉、曲母混合拌勻。然後，裝料入壓曲機，由螺旋推進擠壓成坯。曲坯呈方塊狀，規格為30厘米X20厘米X3厘米，質量約0.5千克。曲坯掛入曲房，保溫保濕培養一周。
（3）成曲：培養一周后開蒸汽乾燥一天，出房，放入餅倉貯存。
2.試驗酒麴的來源及取樣：
（1）從餅倉隨機抽取5噸酒餅，作試驗備用餅，在餅倉中作標識，貯存備用。
（2）從這5噸酒餅中隨機抽取40塊酒餅，分別取餅邊、餅心，混勻，粉碎後用四分法抽取約0.5千克，作分離菌種用。
3.菌種分離純化方法及篩選菌種的過程：
（1）培養基：
1）富集培養基：12Bx麥芽汁，滅菌後冷卻備用。
2）分離、純化培養基：12Bx麥芽汁，滅菌冷卻後加入20克/升乙醇。
3）保存培養基：6Bx麥芽汁，滅菌後冷卻備用。
4）12Bx麥芽汁，滅菌冷卻後添加20克/升乙醇和2克/升乙酸。
（2）富集培養：稱取酒麴樣品10克，放入250毫升三角瓶中，用90毫升無菌水浸泡30分鐘，用玻璃珠（要求直徑為0.5厘米、表面光滑）打散、澄清。取上清液1毫升，用無菌水稀釋10倍，取稀釋液0.5毫升接種於富集培養基中，30±1℃、120轉/分鐘搖床培養2天后，轉接於另一富集培養基中培養2天，如此反覆多次，選取菌體強壯的作為分離對象。
（3）分離培養：
取選取的富集試樣1毫升加入到9毫升無菌水中，依次用10倍無菌水作系列稀釋，稀釋至10-8.取各稀釋度的0.2毫升樣加入到固體培養基平皿中，30±1℃培養2天。
（4）純化培養
選取不同菌落形態、菌體健壯的菌株轉接於試管斜面培養基上，進一步對其純化。再經反覆多次分離、純化，最後得到8株菌種，編號為JJJC-2，A-2，……A-8。分別貯存於6Bx麥芽汁斜面試管。
（5）篩選高酯化力菌株
1）酶液的製備：將待測菌株接入100毫升酯化用液體培養基中，於30±1℃培養5天。
2）酯化酶活力測定
用酯化用液體培養基對分離得到的8種酵母以進行產酯能力對比試驗，29～30℃搖床培養6天，取培養好的酯化培養液加入100毫升自來水蒸餾再用色譜檢測，篩選出一種產酯能力較高的酵母為JJJC-2酵母，試驗結果見下表：
菌株名稱 | 乙酸乙酯（克/升） | 乙酸（克/升） | β-苯乙醇（毫克/升） |
JJJC-2 | 1.2168 | 1.6842 | 5.8 |
JJJC-1 | 0.0671 | 0.0515 | 71.9 |
JJJC-3 | 0.0070 | 0.0321 | 52.7 |
JJJC-4 | 0.0055 | 0.5276 | 21.3 |
JJJC-5 | 0.0135 | 0.0526 | 39.4 |
JJJC-6 | 0.0055 | 0.6188 | 17.1 |
JJJC-7 | 0.0146 | 0.0387 | 47.4 |
JJJC--8 | 0.0090 | 0.5702 | 31.4 |
從上表數據可知，在8株菌的酯化力測定結果中，產酯性能最高的為JJJC-2。因此，可以初步確定JJJC-2為分離篩選的高產酯酵母。
試驗例1
下面以《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》套用於小曲白酒釀酒實驗，論述《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》及其使用方法和效果：
試驗號 | 試驗方案 | 備註 |
1 | 大米蒸熟後，冷卻至28-32°C,加入大米量190克/千克（是指每千克大米的用曲量為190克）的酒麴，加入大米量2倍的水發酵，得到的發酵成熟的醪液作蒸餡。 | 舊菌種，常規工藝 |
2 | 大米蒸熟後，冷卻至28—32°C,加入大米量190克/千克（是指每千克大米的用曲量為190克）的酒麴，同時加入大米量5%的產酯酵母JJJC-2二級種子培養液，加入大米量2倍的水發酵，得到的發酵成熟的醪液作蒸餡。 | 新菌種（產酯酵母JJJC-2直接參與發酵），常規工藝 |
3 | 10克酒麴接入100毫升總糖含量為120克/升的大米澱粉糖化液，30°C攪拌培養20小時作為一級種子培養液。將一級種子培養液按5%的接種量接入裝有300升總糖含量為120克/升的大米澱粉糖化液種子培養罐在30°C攪拌培養20小時，獲得二級種子培養物。發酵培養基與實施例1同。將二級種子培養物按5%的接種量接入裝有1000升的發酵培養液中，在30°C攪拌培養80小時。將得到的發酵液與發酵成熟的醪液以1:30的比例混合串蒸。 | 舊菌種，新工藝（酒麴發酵液與成熟醪液串蒸） |
4 | 與實施例1同。 | 新菌種，新工藝 |
試驗號 | 乙酸乙酯（克/升） | 總酯（克/升） | 乙酸（克/升） | 出酒量（升） | 備註 |
1 | 1.217 | 1.876 | 0.50 | 422 | 舊菌種，常規工藝 |
2 | 1.726 | 2.268 | 0.52 | 415 | 新菌種（產酯酵母JJJC-2直接參與發酵），常規工藝 |
3 | 1.562 | 5.071 | 0.55 | 435 | 舊菌種，新工藝（酒麴發酵液與成熟醪液串蒸） |
4 | 3.186 | 3.795 | 0.62 | 495 | 新菌種，新工藝 |
註：1.表中齋酒酒度均為30％v/v。2.表中數據為小曲米酒的齋酒數據。
從上表數據可知：採用新菌種、新工藝（試驗4）生產的齋酒的乙酸乙酯、總酯、乙酸、出酒量與採用舊菌種、常規工藝（試驗1）生產的齋酒相比均得到明顯提高。採用新菌種、常規工藝（試驗2）與試驗1相比乙酸乙酯、總酯、乙酸都有所提高，但出酒率下降。採用舊菌種、新工藝（試驗3）與試驗1相比乙酸乙酯、總酯、乙酸、出酒率均有所提高，但與試驗4相比，不及試驗4的效果顯著。
樣品名稱 | 品評情況 | 平均分數 | 名次 |
雙蒸空白對照 | 齋味純正，入口較醇甜，稍辣，酒體較豐滿。 | 82 | 2 |
JJJC-2串蒸酒 | 香氣較舒適、酯香明顯，入口甜，酒體豐滿，回味悠長。 | 88 | 1 |
經過品評，認為JJJC-2酵母串蒸酒的香氣較舒適、回味悠長，適用於豉香型酒串香。
榮譽表彰
2016年12月7日，《一株產酯酵母及其生產乙酸乙酯和酒精的方法》獲得第十八屆中國專利優秀獎。
