《β2-微球蛋白在馬立克氏病毒致病與致腫瘤中的作用》是依託揚州大學，由秦愛建擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：β2-微球蛋白在馬立克氏病毒致病與致腫瘤中的作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：秦愛建
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
β2-微球蛋白（β2-M）是MHC-I類分子的β鏈，在腫瘤免疫中有著十分重要的作用。本課題組在蛋白質組學研究中發現了感染馬立克氏病毒（MDV）強毒雞羽囊細胞中β2-M顯著升高。為深入了解β2-M 在MDV致腫瘤中的生物學功能，本課題通過測定β2-M在MDV腫瘤發展中的免疫學調節作用和可能的促細胞生長功能，確定β2-M信號傳導分子機制和下游信號通路的特點，從而探索β2-M作為腫瘤治療新靶位的可能性，為了解MDV感染過程病毒與宿主的相互作用，為人類癌症控制和MD的有效防治提供理論依據，有十分重要的理論意義。
結題摘要
β2-微球蛋白（β2M）是主要相容性複合體（MHC）I類分子的恆定鏈(輕鏈)，對MHC-I類分子在細胞表面穩定表達和有效遞呈抗原肽必不可少。在人類一些腫瘤中，β2M與腫瘤的生存、侵襲、凋亡，甚至轉移有關。馬立克氏病毒（MDV）是雞的一種高度致腫瘤性病毒，作為研究癌症的模型有其重要意義。 本項目套用螢光定量PCR技術對chβ2m、MHC-I和Meq在MDV感染不同細胞中基因表達水平進行了檢測。研究結果表明，chβ2m與MHC-I在MDV感染不同細胞中呈波動式變化，與MHC-I相比，chβ2m在感染前期出現異常表達上調，提示chβ2M在MDV感染過程中具有潛在的功能。 套用RT-PCR從正常免疫雞外周血淋巴細胞總RNA中擴增chβ2m 基因，將其克隆到原核表達載體，經表達，純化獲得大量可溶性chβ2m融合蛋白。利用chβ2m中的29個肽段免疫小鼠，通過雜交瘤技術篩選出五株抗chβ2M 的mAb，流式細胞術表明3D1可以與MSB1細胞中天然的chβ2M反應；免疫組化分析發現，在胸腺、脾臟、法氏囊等免疫器官均能表達chb2m，但不同區域細胞的表達水平具有差異性。 在正常培養的MSB1細胞中加入不同濃度chβ2m抗體後利用CCK-8法檢測細胞生長活力，然後通過Annexin V/PI流式細胞術、DNA ladder和DAPI核染色觀察chβ2m抗體對MSB1細胞的凋亡情況，並利用Real-time PCR檢測凋亡相關信號分子caspase-3、8、9的表達。結果顯示，抗chβ2m抗體對MSB1細胞生長活力有抑制作用；流式細胞術分析發現，抗chβ2m抗體可明顯引起MSB1細胞的凋亡，並進一步證明抗體阻斷chβ2M後可通過caspase-9和caspase-3的高表達引起MDV腫瘤細胞MSB1的凋亡。 通過MDV感染CEF細胞後利用脂質體轉染的方法將不同濃度pcDNA3.1-chβ2m和pcDNA3.1分別轉染CEF細胞，在不同時間點套用Real-time PCR檢測不同轉染組細胞內gB、meq以及chβ2m的基因表達水平。結果表明，MDV在體外過表達chβ2m 的CEF細胞中複製能力相應上調，可為chβ2m在MDV-宿主相互作用關係中的作用研究提供理論價值。
