sRAGE糾正mRAGE/sRAGE失衡在肺間質纖維化中的保護作用及分子機制

《sRAGE糾正mRAGE/sRAGE失衡在肺間質纖維化中的保護作用及分子機制》是依託同濟大學，由何梅擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：sRAGE糾正mRAGE/sRAGE失衡在肺間質纖維化中的保護作用及分子機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：何梅
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

晚期糖基化終產物受體(RAGE)主要在肺部表達,以細胞膜型(mRAGE)和可溶型(sRAGE)形式存在。RAGE與肺間質纖維化密切相關，然而RAGE的作用尚不清楚。我們既往的研究發現RAGE基因敲除鼠沒有出現博萊黴素誘導的肺間質纖維化，而IPF患者血清內源性分泌的sRAGE減少。由此我們提出肺損傷後，肺內RAGE表達向mRAGE偏移，sRAGE減少，導致mRAGE/sRAGE失衡，促使肺間質纖維化發生的假說。為驗證這一假說，我們將在博萊黴素肺纖維化小鼠模型上，觀察肺組織mRAGE和sRAGE的動態變化,並予以sRAGE干預，證明肺纖維化時mRAGE/sRAGE失衡，糾正sRAGE丟失對肺纖維化的抑制作用。結合sRAGE對促纖維化因子變化的影響以及對原代肺泡II型上皮細胞EMT變化的影響，探討sRAGE對肺纖維化保護作用機制。為建立肺間質纖維化的預測指標並為提供新的治療靶點奠定理論基礎。

結題摘要

晚期糖基化終產物受體（receptor for advanced glycation end products，RAGE）在肺以外的組織中傳導炎症信號，健康成人的肺部卻大量表達RAGE。 既往的研究發現，在博萊黴素（BLM）誘導的肺纖維化模型中，RAGE基因敲除小鼠的肺損傷受到保護。然而可溶性晚期糖基化終產物受體（soluble　RAGE，sRAGE）在肺纖維化小鼠模型中的作用需要進一步闡述，本研究將闡明sRAGE在小鼠肺纖維化模型中的作用並解明其作用機制。 C57BL/6小鼠氣管內注入BLM，用建立肺纖維化模型，並分為對照組（control組）和sRAGE干預組（sRAGE組），sRAGE組經腹腔注射sRAGE，control組注射PBS。在第0、3、7、21天觀察肺組織學變化，肺泡灌洗液(BALF)中炎症細胞和蛋白變化，TGF-beta1、 HMGB-1的水平。我們將分離培養原代小鼠II型肺泡上皮細胞建立HMGB-1 誘導的EMT變， 加入sRAGE後觀察細胞的上皮細胞、間質細胞標誌物的變化，評價sRAGE對EMT的影響．3天后sRAGE組肺組織中炎症細胞浸潤明顯輕於對照組，21天后sRAGE組的肺纖維化較對照組減輕。sRAGE組BALF中炎症細胞總數較對照組低，其中主要的炎症細胞為中性粒細胞。發現sRAGE組BALF中蛋白總含量較對照組低, sRAGE干預組BALF的TGF-beta1、HMGB-1的水平較對照組減少。在分離培養的原代小鼠II型肺泡上皮細胞中，加入HMGB-1後激活RAGE/HMGB-1通路，檢測並發現間質細胞標誌物mRNA alpha-SMA水平升高，上皮細胞標誌物mRNA E-cadhrin的水平降低， 提示激活RAGE/HMGB-1通路誘導II型肺泡上皮-見皮細胞轉化（EMT）。在這個體系中加入sRAGE後發現上皮細胞標誌物E-cadhrin的mRNA水平沒有明顯丟失，間質細胞標誌物mRNA alpha-SMA水平沒有明顯升高，提示sRAGE可能阻斷了RAGE/HMGB-1軸誘導的EMT。結論以及意義： sRAGE減輕BLM誘導的小鼠肺纖維化。其可能的機理是sRAGE減輕了博萊黴素誘導的急性期肺損傷，並通過阻斷RAGE/HMGB-1信號通路作用於前纖維化生長因子，同時sRAGE抑制肺泡上皮細胞EMT，從而抑制了肺纖維化的發生。