《microRNAs介導無創肢體缺血預適應心肌細胞保護的機制研究》是依託天津醫科大學，由吳艷娜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：microRNAs介導無創肢體缺血預適應心肌細胞保護的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：吳艷娜
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
在前期已建立大鼠無創肢體缺血預適應(NLIP)模型，並證實其延遲相心臟保護作用強度與心臟原位缺血預適應相當的基礎上，本項目擬利用晶片檢測技術構建經歷NLIP及缺血再灌注損傷的大鼠心臟微小RNAs(miR)表達圖譜，篩選差異表達miR，展示NLIP誘導的心臟miR表達變化。對有意義的差異表達miR，通過構建其重組質粒及其預測靶基因的螢光蛋白報告基因質粒，轉染H9c2心肌細胞，再行缺氧/復氧(H/R)實驗，觀察目的miR高表達或封閉其表達對H/R損傷和預測靶基因表達的影響，以檢測miR是否在NLIP心肌細胞保護中發揮關鍵性調節作用及其靶基因，從全新角度闡釋NLIP的心肌細胞保護作用機制，豐富和發展NLIP延遲心臟保護作用機制的理論內容，為缺血性心臟病的防治提供可能的作用靶點，為NLIP的臨床套用提供理論依據。
結題摘要
背景及目的：無創肢體缺血預適應(limb ischemic preconditioning, LIPC) 是目前最具臨床套用潛力的內源性心臟保護策略。微小RNAs(microRNAs, miR)是心血管疾病的重要調節因子，其是否在LIPC的心臟保護中發揮關鍵性調節作用，尚未見文獻報導。本研究的目的是檢驗心臟miR在LIPC時的變化及其在LIPC心肌細胞保護中是否發揮關鍵性調節作用。 材料與方法：套用miR晶片檢測技術，描繪LIPC誘導的大鼠心臟miR表達圖譜變化，qRT-PCR對部分差異表達的miR進行驗證；構建miR重組慢病毒，感染H9c2心肌細胞，檢測LIPC誘導的差異表達miR在H9c2心肌細胞缺氧/復氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)損傷中的作用；雙螢光素酶報告基因檢測系統檢測miR靶基因；構建miR靶基因過表達重組慢病毒，感染H9c2心肌細胞，檢測差異表達miR的靶基因在H9c2細胞H/R損傷中的作用。 結果：（1）將經歷LIPC和缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）的大鼠心肌組織總RNA進行晶片檢測，經組間兩兩比較，共發現30個差異表達的miR。經qRT-PCR驗證，miR-139-5p等3個miR均呈現在I/R組表達增加、在LIPC組表達減少的趨勢。選擇優先對miR-139-5p進行功能研究。（2）將miR-139-5p inhibition重組慢病毒感染H9c2細胞，建立miR-139-5p下調的H9c2穩定轉染細胞系，行H/R損傷實驗。與陰性對照組比較，miR-139-5p下調組對H/R損傷的耐受性增強，表現為細胞生存率增加(P<0.01)，乳酸脫氫酶漏出減少(P<0.01)，細胞凋亡減輕。（3）雙螢光素酶報告基因檢測系統檢測表明，CIAPIN1為miR-139-5p的靶基因。（4）將CIAPIN1過表達重組慢病毒感染H9c2細胞，建立CIAPIN1過表達的H9c2穩定轉染細胞系，行H/R損傷實驗。與陰性對照組比較，CIAPIN1過表達組細胞存活率有增加趨勢。 結論：LIPC引起大鼠心肌組織miR表達譜發生改變，其心臟保護作用可能是通過減少miR-139-5p的表達，進而增加CIAPIN1的表達實現的。本研究為缺血性心臟病的防治提供了新的可能的作用靶點，為NLIP的臨床套用提供理論依據
