《microRNA-30對脂肪細胞perilipin自噬性降解的作用研究》是依託上海交通大學，由楊穎擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA-30對脂肪細胞perilipin自噬性降解的作用研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊穎
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
脂肪細胞內脂滴是一個代謝活躍、高度動態的細胞器，是調控機體脂類和能量平衡的核心點。Perilipin是脂肪細胞內最主要的脂滴表面蛋白，參與脂滴從發生到成熟的全過程，並在甘油三酯的貯存和分解中發揮重要作用。Perilipin的調控機制目前尚不清楚。我們前期發現自噬途徑參與Perilipin的降解；miR-30可通過重要自噬蛋白Beclin1抑制脂肪細胞自噬，同時伴隨Perilipin含量升高。我們構想miR-30可通過抑制Perilipin的自噬性降解，影響脂滴重塑及脂質代謝，實現對機體能量代謝的調節。我們擬從兩個方面展開工作：1、細胞水平全面闡述miR-30調控Perilipin的分子機制；2、構建脂肪組織特異miR-30e Tg小鼠，及miR-30e Tg/Beclin1 Tg雙轉基因小鼠，整體水平研究miR-30→autophagy→Perilipin途徑在調控脂肪細胞功能中的作用
結題摘要
脂肪細胞內脂滴是一個代謝活躍、高度動態的細胞器，是調控機體脂類平衡和能量平衡的核心點，而脂滴表面蛋白在脂滴的形成、融合和代謝調節中起到了重要作用。在脂滴表面蛋白中，最為重要的是脂滴結構蛋白 PAT 家族蛋白， Perilipin是最早發現的PAT蛋白，其中Perilipin A 特異在脂肪細胞表達，是成熟脂肪細胞最主要的脂滴表面蛋白，參與了脂滴從發生到成熟的全過程，在能量儲存及脂質調節方面發揮著不可替代的作用。基於前期工作發現脂肪細胞內perilipin存在溶酶體降解途徑，因此我們對脂肪細胞內自噬途徑如何參與perilipin的降解進行了探討。①首先對11例正常體重者和10例單純性肥胖患者的內臟脂肪組織進行了轉錄組測序分析，得出1556個差異表達基因。選取文獻報導的322個小鼠自噬/溶酶體基因，將其取交集得到36個差異表達的自噬/溶酶體基因。其中肥胖組中有35個上調基因和1個下調基因，說明肥胖狀態時自噬/溶酶體基因顯著上調。②自噬的標誌性蛋白LC3I/II的蛋白表達在肥胖小鼠的皮下和內臟脂肪細胞均顯著上調，提示肥胖狀態時脂肪組織中的自噬可能是激活的。脂肪細胞給予含有炎症因子的條件培液PLA-CM後，發現自噬相關基因的表達上調，並可能反映脂肪細胞中自噬流增加。③對perilipin蛋白進行了外源性泛素化檢測，顯示Perilipin是一個可被泛素化的蛋白。自噬相關蛋白BECN1敲減抑制自噬後，perilipin的蛋白表達明顯增加。④TNFα可上調脂肪細胞中SQSTM1/p62的表達，提示SQSTM1/p62可能是作為一個自噬受體發揮其功能的。CoIP結果表明泛素化的perilipin可與SQSTM1/p62結合，進而被自噬性降解。因此TNFα可通過SQSTM1依賴的選擇性自噬對perilipin的降解產生影響，進而促進脂解，且TNFα促進的perilipin的降解是CTSB依賴的。⑤我們進一步研究發現miR-30直接作用於Beclin1，抑制脂肪細胞自噬，進而抑制肥胖導致的Perilipin的自噬性降解。以上研究結果提示肥胖狀態時脂肪組織自噬過度激活，引起脂肪細胞最重要的脂滴表面蛋白Perilipin的自噬性降解，進而影響脂質的分解和貯存及機體的能量代謝。
