《miRNA靶基因3'UTR內SNP對結直腸癌發病的影響及其後續功能分析》是依託四川大學，由魏永剛擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miRNA靶基因3'UTR內SNP對結直腸癌發病的影響及其後續功能分析
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：魏永剛
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
遺傳因素是導致結直腸癌發病的重要因素，以往研究已經發現多個相關基因中的單鹼基多態性（SNPs）與結直腸癌發病的相關性，但SNPs影響相關基因表達而導致結直腸癌發病的機制仍不清楚。近期研究表明，miRNA靶基因3'UTR記憶體在的SNPs可影響miRNA與靶基因結合而導致基因表達失調。為了解miRNA靶基因內3'UTR的SNPs是否以及通過何種機制參與了結直腸癌的發病，本項目擬①利用生物信息學技術初步篩選結直腸癌發病相關基因中可與miRNA結合的3'UTR端存在的SNPs，結合高通量焦磷酸測序對所得SNPs進行初步驗證；②利用SNPs分型找出病例及對照中存在顯著性差異的SNPs；③對所得SNPs對於相關基因的表達影響進行分析。嘗試闡明miRNA靶基因3'UTR內SNPs對結直腸癌發病的影響機制，為研發新的結直腸癌診斷治療手段提供科學基礎。
結題摘要
近期研究表明，miRNA靶基因3’UTR記憶體在的SNPs可影響miRNA與靶基因結合而導致基因表達失調。為了解miRNA靶基因內3’UTR的SNPs是否以及通過何種機制參與了結直腸癌的發病，本研究通過生物信息學及高通量焦磷酸測序篩選出CD86 rs17281995、IL-16 rs1131445、GHR rs2973016、INSRrs1051690、IL1A rs3783553、APC rs397768以及KRAS s712等七個在病例組與對照組之間分布頻率有顯著差異的SNPs。在用RFLP對每一樣本的具體基因型進行確定後，我們發現：CD86 rs17281995中GG基因型和G等位基因與結直腸癌發病相關；KRAS rs712 中TT基因型和T等位基因明顯增加結直腸癌發病率；IL-16 rs1131445中TT基因型和T等位基因是結直腸癌發病的危險因素；INSR rs1051690中GG基因型和G等位基因對結直腸癌發病具有保護作用。對KRAS rs712和IL-16 rs1131445的功能驗證中我們發現：在KRAS rs712的功能檢測中，突變型（T）和空白3’UTR結合區的轉染細胞在目的基因KRAS的螢光表達上強於野生型（p=0.011），而在腫瘤樣本的mRNA和蛋白表達上，T基因型強於G基因型（ p=0.033, p=0.018）。在IL-16 rs1131445的功能檢測中，突變型（C）和空白 3’UTR結合區的轉染細胞在目的基因蛋白的表達上弱於野生型（ANOVA, p=0.047），儘管腫瘤樣本的IL-16 mRNA兩組並無顯著性差異（p=0.332），但IL-16蛋白表達兩組之間仍有顯著性差異（p=0.021）。本研究表明，位於miRNA 3’UTR結合區的SNPs與結直腸癌發病具有相關性，KRAS rs712可能通過影響miRNA與KRAS mRNA結合導致KRAS mRNA無法降解導致KRAS基因異常高表達導致腫瘤發生，而IL-16 rs1131445對IL-16的影響主要表現在蛋白表達水平，對基因轉錄並無影響，可能機制是由於 rs1131445影響了miRNA與IL-16mRNA結合，從而抑制IL-16表達。
