《miRNA對UGT1A1表達和活性的調控及機理研究》是依託浙江大學，由徐思雲擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：miRNA對UGT1A1表達和活性的調控及機理研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：徐思雲
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
UGT1A1是一種重要的二相代謝酶，能催化許多內源性分子和藥物的代謝。miRNA則是長度為22 nt左右的內源非編碼小RNA，通過作用於相應靶mRNA的3'端非編碼區導致靶基因的降解或翻譯抑制。由於miRNA能夠通過調控藥物代謝酶的表達來改變其代謝活性，從而影響藥物療效或毒性，因此成為目前的研究熱點。本課題在前期工作的基礎上，擬通過分子生物學方法在結腸癌細胞中篩選出能夠與UGT1A1作用的miRNA；進而在正常結腸細胞和結腸癌細胞中，研究UGT1A1的表達和抗腫瘤藥物伊立替康、尼洛替尼的細胞毒性的關係；闡明miRNA對UGT1A1的調控作用機理和對抗腫瘤藥物活性的影響，明確miRNA與UGT1A1甲基化、UGT1A1表達和抗腫瘤藥物活性的關係,為指導UGT1A1底物個體化用藥提供科學依據。
結題摘要
尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶（UGT1A1）是一種重要的二相代謝酶，能催化許多內源性物質和藥物的代謝。其表達受多種因素影響，比如miRNA和DNA甲基化等。了解UGT1A1異常表達機制，可為指導UGT1A1底物個體化用藥提供科學依據。我們套用軟體預測了與UGT1A1相互作用的miRNA，通過報告基因實驗篩選，結果表明miR-200a和miR-141與UGT1A1 3’端非編碼區作用較強，並呈現濃度依賴性。檢測到UGT1A 3'-UTR存在3個SNP位點，且MAF值均大於10%。報告基因功能篩選結果表明，miR-1286可以與SNP(rs8330)位點結合，可能抑制UGT1A1的轉錄或翻譯。與配對的癌旁組織相比，在肝和結腸癌組織中UGT1A1、1A3和1A4的mRNA水平均顯著下調；在結腸癌組織中UGT1A8、1A9和1A10的表達量也顯著低於配對的癌旁組織。在肝癌組織中miR-200a-5p的表達量顯著升高，miR-200a-3p和miR-143-3p有微弱上調，而miR-141-3p和miR-183-5p的表達水平無顯著變化；在結腸癌組織中，只有miR-183-5p的表達量顯著升高，其他4個miRNA的表達水平則都沒有顯著變化。miRNA轉染細胞後表達量顯著增加，但沒有顯著性抑制UGT1A1的轉錄和翻譯。以伊立替康的代謝物SN-38為底物，檢測miRNA對細胞毒性有影響。利用DNA甲基化轉移酶1（DNMT1）抑制劑地西他濱（Decitabine，簡稱DAC）和Zebularine（ZEB）處理細胞，可以誘導HepG2和HT29細胞中UGT1A1表達。miR-148a和miR152在肝癌組織中的表達顯著下調，轉染HepG2和HT29細胞，DNMT1表達沒有差異。報告基因實驗證明，miR-148a和miR-152沒有直接與UGT1A 3'-UTR相互作用，而可能通過抑制DNMT表達，影響UGT1A1啟動子區甲基化，最終改變UGT1A1的表達水平。
