《miR-34a對NanogP8調控肺癌啟動細胞功能的抑制作用》是依託同濟大學，由王軍臣擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-34a對NanogP8調控肺癌啟動細胞功能的抑制作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王軍臣
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
肺癌的發生和難治與癌啟動細胞/癌幹細胞（CSC）有關。轉錄因子Nanog（Nanog1）還是NanogP8（NP8）調控CSC功能特性和介導肺癌的機制不明確。我們前期實驗提示①肺癌細胞表達NP8，而良性病變則為Nanog1；②miR-34a負調控CD44hi肺CSC和實驗性抑制肺癌，並可負調控NP8+CSC中NP8表達。本項目在前期基礎上用NP8功能獲得與缺失、NP8-GFP 細胞分選、miR-34a示蹤 /轉染及系列先進的細胞與分子技術，在體內外研究①不同的肺CSC功能群NP8的表達；②NP8調控肺CSC自我更新功能和促進肺癌的分子機制；③ miR-34a抑制NP8操控的肺CSC功能和抑制肺癌作用。通過NP8和miR-34a分別正負調控肺CSC的研究，將闡釋NP8啟動肺癌和miR-34a/NP8信號通路抑制肺癌的分子機制，對探討肺癌的新療法新靶點將具有重要的科學意義和轉化套用價值。
結題摘要
肺癌的發生和難治與癌啟動細胞/癌幹細胞（CSCs）有關。本研究中，我們研究了人肺癌及肺CSC的NanogP8（以下簡稱NP8）表達、NP8調控肺CSC自我更新功能和miR-34a抑制NP8操控肺CSCs功能的作用靶點。①先檢測了人肺癌和肺癌細胞系NP8表達。免疫組化結果顯示，肺腺癌和鱗癌中Nanog1/NP8在低分化癌組顯著高於高-中分化癌組，提示Nanog1/NP8的表達與肺癌分化程度密切相關；從A549、H460和H1299細胞中流式分選ALDH+/ ALDH-、CD90+/ CD90-、CD44hi和CD44low、SP/非SP亞群，RT-PCR和Western blot檢測顯示NP8 mRNA及蛋白表達水平在CSCs中顯著高於非CSCs；②用可誘導性（doxycycline, dox）NP8慢病毒質粒，並設對照質粒Plvx-Teton-only、Nanog shRNA和RLL3.7，轉染A549、H446、H460和H1299肺癌細胞。結果顯示，正負雙向調控NP8表達分別對肺癌細胞增殖、克隆形成和侵襲能力具有明顯促進和抑制作用，提示在gain-of-function水平NP8具有調控肺癌啟動細胞自我更新潛能；③用NP8啟動子驅動的表達報告質粒NP8-GFP轉染H1299細胞。NOD/SCID小鼠體內移植成瘤結果顯示，NP8+組成瘤顯著高於NP8-組（P＜0.0001），而H460和A549細胞均顯示NP8有促成瘤趨勢。體外實驗顯示，NP8+組的細胞增殖、克隆擴增能力與侵襲能力顯著增強；培養中活細胞實時間斷顯微攝影顯示NP8+的H1299細胞自我更新時呈非對稱分裂模式。流式分析顯示，NP8+的H1299細胞G2/M期細胞明顯增多；④轉染過表達mir34a可抑制肺癌細胞NP8、SOX2和OCT4的表達。雙螢光素酶報告基因分析顯示NP8是mir34a靶分子。總之，NP8持有促進CSC自我更新和腫瘤啟動功能，是miR-34a的靶點。後續增補的CRISPR/CAS9技術對NP8敲除與敲入的Mir-34a體內外實驗和生物信息分析將進一步深化和擴大研究成果。通過NP8和miR-34a分別正負調控肺CSCs的研究，將對闡釋肺癌CSCs自我更新的信號機制和尋找肺癌治療新靶點與靶向CSCs新療法有重要的科學意義和轉化套用價值。
