《miR-26b介導Smads信號途徑參與鵝顆粒細胞增殖分子機制》是依託揚州大學，由趙文明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-26b介導Smads信號途徑參與鵝顆粒細胞增殖分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：趙文明
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
鵝的產蛋性能低下嚴重阻礙了產業的發展。研究證實，顆粒細胞的增殖和凋亡又與卵泡發育和產蛋性能高低密切相關。本項目前期研究已發現miR-26b參與FSH介導的鵝卵泡顆粒細胞增殖，並鑑定出其差異表達基因在Samds信號通路顯著富集。據此我們假設miR-26b介導Smads信號途徑調控GCs細胞增殖，進而影響卵泡發育。為此本項目通過添加特異性阻斷劑探討miR-26b受 Smads 信號途徑調控分子機理；重點研究miR-26b 靶向Smads信號途徑的中心元件Smad4參與顆粒細胞增殖分子機制；並採用啟動子缺失突變和ChIP等技術解析Smad4通過pri-miR-26b轉錄調控介導顆粒細胞增殖的作用機理。研究將揭示miR26b對鵝顆粒細胞增殖的調控機理，為全面闡明鵝低繁殖力分子機制提供基礎資料。
結題摘要
產蛋性能低下是制約鵝產業的發展的重要原因之一。卵泡顆粒細胞的增殖和凋亡與鵝產蛋性能密切相關。前期研究發現，miR-26b-5p參與鵝卵泡顆粒細胞增殖，其差異表達基因在Samds信號通路顯著富集。據此我們假設miR-26b-5p介導Smads信號途徑調控鵝卵泡細胞的增殖，進而影響鵝產蛋性能。本項目探究了miR-26b-5p對鵝卵泡顆粒細胞增殖的影響，進而闡明miR-26b-5p通過介導TGF-β/SMADs信號通路發揮其生物學功能及轉錄調控機制。這不僅揭示了miR-26b-5p參與鵝卵泡顆粒細胞增殖的作用機理，同時也為提高鵝產蛋量提供一定理論依據。1、miR-26b-5p參與鵝卵泡顆粒細胞增殖，促進雌二醇分泌研究結果發現轉染miR-26b-5p mimics後顆粒細胞增殖率顯著上升81.2%，轉染miR-26b-5p inhibitor後細胞增殖被抑制；過表達miR-26b-5p後抗凋亡基因BCL-2表達量顯著升高，促凋亡基因Caspase-3表達量顯著降低，而抑制內源性miR-26b-5p表現出相反趨勢(P＜0.01)。此外，過表達miR-26b-5p可以顯著增加雌二醇水平，降低孕酮水平，而抑制內源性miR-26b-5p後表現出相反的趨勢(P＜0.05)。2、miR-26b-5p靶向INHBB基因促進卵泡顆粒細胞增殖miR-26b-5p可與INHBB基因的3’-UTR結合併極顯著抑制螢光素酶活性(P＜0.01)，而不能抑制SMAD4螢光素酶活性；此外，miR-26b-5p可以顯著降低INHBB基因的表達水平和翻譯蛋白質水平(P＜0.05)。3、轉錄因子SMAD4啟動miR-26b-5p轉錄參與鵝卵泡顆粒細胞增殖調控為闡明miR-26b-5p參與鵝卵泡顆粒細胞增殖的轉錄機制，對miR-26b-5p基因啟動子區序列發現的3個SMAD4結合位點進行分析。結果發現過表達SMAD4可以極顯著增加miR-26b-5p的表達量(P＜0.01)，轉染含SBE3片段，其螢光活性顯著增強(P＜0.01)，因此SMAD4可作為miR-26b-5p的一種轉錄因子。綜上所述，miR-26b-5p受轉錄因子SMAD4轉錄調控，並通過靶向INHBB介導TGF-β/SMADs信號通路，促進鵝卵泡顆粒細胞的增殖。
