《miR-221 促進喉返神經損傷後修復機制的研究》是依託上海交通大學，由董頻擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miR-221 促進喉返神經損傷後修復機制的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：董頻
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
針對微小RNA通過轉錄後調控對神經細胞分化、增殖和存活發揮重要作用。課題組前期研究表明miR-221在喉返神經損傷後表達上調，但它在神經損傷修復中的作用及其機制尚不明確。我們已經通過生物信息學分析，預測miR-221可能的靶基因為PTEN，進而通過PI3K/Akt信號通路和其下游的GSK-3β促進周圍神經損傷修復。同時，SOCS作為已知的miR-221靶基因，亦可能受其抑制而激活JAK/STAT通路參與周圍神經損傷修復。即miR-221可能作為喉返神經修復不同信號通路的共同調節因子。為驗證以上假說, 本課題擬通過體內、體外miR-221慢病毒轉染實驗，首度確認其在神經細胞修復中的功能；並使用雙螢光酶報告系統驗證PTEN為其作用的靶基因；並分別通過上述兩條信號通路證明miR-221在神經細胞修復中的重要作用；深度揭示miR-221促進喉返神經修復的機制，為喉返神經損傷的基因治療提供新的靶點。
結題摘要
前期研究發現大鼠喉返神經損傷後miR-221表達呈現一個逐步升高的趨勢，我們猜測miR-221在外周神經損傷修復中可能扮演著很重要的作用，成功構建miR-221過表達和敲減的慢病毒質粒，感染PC12細胞，證實了miR-221體外促進神經生長增殖的作用並研究對下游PTEN，SOCS等靶點影響，骨髓間充質幹細胞（BMSC）因具有向多系分化的潛能，在外周神經損傷修復的研究中頗受關注，成功提取BMSC並上調miR-221表達，在mRNA、蛋白以及細胞分泌水平都表明miR-221能進一步促進BMSC中BDNF和GDNF的表達，transwell共培養體系顯示miR-221可以進一步增強BMSC趨化雪旺細胞遷移聚集的能力；通過NSE染色發現miR-221上調的BMSC出現部分突觸樣伸出，神經細胞分化趨勢更明顯。體內研究示miR-221上調的BMSC處理組和BMSC對照處理組相比PBS處理組喉返神經修復和相關功能恢復更好，但上調組和對照組間無顯著性差異。結論表明miR-221表達水平與神經細胞的增殖呈現一定的正向關係，其水平上調對BMSC神經營養因子的表達有促進作用且能進一步增強BMSC趨化雪旺細胞遷移聚集的能力並增強BMSC向神經細胞分化的潛能，這為miR-221及BMSC參與喉返神經損傷修復的進一步研究提供了重要理論基礎。體內研究證實了骨髓間充質幹細胞對喉返神經擠壓傷修復的積極作用，雖然miR-221並非獨立影響其修復作用的因素，但通過細化評估手段和觀察視窗仍很可能進一步確認miR-221的相關治療優勢。
