miR-155誘導AT1R/B2R異源二聚體致子癇前期發病的通路機制研究

項目摘要

子癇前期(PE)是我國孕產婦死亡第二原因，但發病機制不清。PE胎盤形成及母體PE樣病理變化與發病機制研究關聯密切。免疫炎症過度激活是PE胎盤形成重要機制，我們發現PE患者及免疫炎症過度激活的大鼠PE模型中微小RNA-155(miR-155)高表達，當競爭抑制miR-155後大鼠PE樣症狀消失。已有研究證明miR-155靶向作用於SHIP-1可上調緩激肽受體(B2R)表達；另外B2R高表達促異源二聚體B2R/AT1R形成，致血管緊張素II敏感性增加是母體PE樣病理變化重要基礎。由此提示miR-155是關聯PE胎盤形成及PE樣病理變化的關鍵因子。本研究圍繞PE臨床標本、動物模型及體外實驗，通過免疫共沉澱、Western Blotting、qRT-PCR等研究miR-155介導SHIP-1/異源二聚體B2R/AT1R通路，闡明其為PE重要發病分子機制，為藥物治療提供新靶點，為臨床防治提供新支撐。

結題摘要

（1）我們在前期驗證miR-155與相關基因存在密切關聯的基礎上，設計miR-155高表達和低表達HTR-8細胞模型，發現miR-155高表達後，B2R表達顯著減少，反之亦然。然而miR-155高表達和低表達後SHIP-1、TNF-a及AT1R無明顯變化。同時我們還利用雙螢光素酶報告基因實驗進一步證實miR-155對B2R 3’UTR的負向調節作用。（2）本課題組通過IP(免疫共沉澱)實驗驗證B2R/AT1R異源二聚體的存在，然而miR-155高表達後，B2R/AT1R表達不穩定。同期德國學者在cell雜誌上發表了PE患者的二聚體表達異常及藥物干預的研究與擬定研究計畫高度重合，根據我們研究實際情況和文獻檢索結果，我們將研究重心調整至B2R及相關分子對胎盤的影響上。（3）通過對臨床樣本的研究，發現B2R主要在合體滋養細胞和絨毛外滋養細胞中表達，且早髮型重度子癇前期（sPE）患者胎盤組織中B2R的表達明顯低於孕齡相當的非感染性早產（nPTB）患者。（4）通過體外細胞實驗，證實高表達B2R提高滋養細胞存活率、抑制其凋亡，且可促進G0/G1期細胞向S期過渡，促進了細胞的增殖活性。B2R分別通過CCND-1和VEGF-A促進滋養細胞增殖和遷移、侵襲及成環；通過PI3K/AKT信號通路促進PLGF表達和分泌，並促進HUVECs的血管形成功能。（5）我們利用syncytin啟動子介導的miR-155高表達質粒構建了胎盤特異性高表達 miR-155的小鼠模型。無論父源性或母源性胎盤高表達miR-155均導致孕鼠出現高血壓、腎臟損傷、胎兒生長受限等PE症狀。胎盤轉錄組晶片分析提示B2R顯著降低，目前正基於該模型從動物實驗角度進一步驗證前期細胞水平相關通路的影響及對通路中分子靶位點干預後PE症狀的改變。本研究闡明了miR-155調控緩激肽受體2低表達作為子癇前期胎盤形成障礙的重要作用機制，為子癇前期防治提供新支撐。

miR-155誘導AT1R/B2R異源二聚體致子癇前期發病的通路機制研究

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