hUHRF1與乳腺癌細胞輻射敏感性的關係及機制研究

《hUHRF1與乳腺癌細胞輻射敏感性的關係及機制研究》是依託蘇州大學，由李新莉擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：hUHRF1與乳腺癌細胞輻射敏感性的關係及機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：李新莉
• 依託單位：蘇州大學

項目摘要

輻射抗性是乳腺癌放療後復發的主要原因，研究與放療相關基因，闡明其與乳腺癌輻射敏感性的關係及調控機制具有重要意義。我們發現hUHRF1可以降低腫瘤細胞的輻射敏感性，本項目擬深入研究hUHRF1對不同p53和Rb表型乳腺癌細胞及正常乳腺細胞輻射敏感性的影響及作用機制。研究電離輻射對正常乳腺細胞和乳腺癌細胞中hUHRF1 mRNA和蛋白表達水平的影響；分離和鑑定hUHRF1的輻射調控結構域；採用基因轉染和siRNA技術改變hUHRF1的表達水平，觀察細胞輻射敏感性的變化；利用雷射共聚焦、Western blot、宿主細胞修復反應、免疫共沉澱、輻射細胞生物學效應檢測等，從自噬、信號通路、DNA損傷修復、蛋白間相互作用的角度，探索hUHRF1調控細胞輻射敏感性的作用機制，這些研究將為更好的實施乳腺癌放療和將hUHRF1作為潛在的放療分子靶標提供實驗基礎與理論依據。

結題摘要

輻射抗性是乳腺癌放療中亟需克服的問題。研究與放療相關基因，闡明其與乳腺癌輻射敏感性的關係及調控機制具有重要意義。在篩選乳腺癌輻射敏感基因的過程中，我們發現一新的輻射相關基因hUHRF1。本項目在大量前期研究基礎上，通過分析不同條件輻射照射，對正常乳腺細胞及不同p53和Rb基因表型乳腺癌細胞hUHRF1表達水平的影響，表明電離輻射可以誘導hUHRF1的表達，電離輻射對乳腺癌細胞hUHRF1表達水平的影響，存在照射劑量和時間的依賴性，且與乳腺癌細胞的p53和Rb基因表型有關。採用基因轉染和小分子RNA干擾技術，增強和抑制hUHRF1的表達水平，觀察不同輻射照射條件下細胞輻射敏感性的變化的結果顯示：hUHRF1的高表達，降低了乳腺癌細胞細胞的輻射敏感性，而採用siRNA抑制hUHRF1的表達，則可以增強細胞的輻射敏感性，明確了hUHRF1基因是一輻射抗性基因。我們構建了包含hUHRF1不同結構域的表達載體，通過集落形成實驗發現，hUHRF1介導的乳腺腫瘤細胞的輻射耐受或抵抗，可能是由多個結構域（SRA和RING結構域）介導。流式細胞術、雷射共聚焦、Western Blot及染色體畸變分析等的結果顯示，hUHRF1的高表達可以誘導乳腺腫瘤細胞的G2期阻滯，抑制X-ray誘導的細胞凋亡，調控DSB修復及凋亡相關蛋白的表達，抑制X-ray誘導的染色體畸變等途徑，介導輻射耐受或抵抗。上述的實驗結果證實，hUHRF1為一輻射抗性基因，可以通過多種途徑介導輻射抵抗，研究結果為更好地實施乳腺腫瘤放療，提高腫瘤臨床放射治療的療效，以及將hUHRF1作為腫瘤輻射敏感性診斷指標和輻射基因治療的靶標提供重要的理論依據。