《eNOS介導外源性硫化氫促進損傷血管再內皮化的機制研究》是依託中山大學，由聶如瓊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：eNOS介導外源性硫化氫促進損傷血管再內皮化的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：聶如瓊
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
早期血管再內皮化是防止冠脈支架內血栓的重要策略。我們前期研究發現外源性硫化氫能促進動脈損傷後血管內皮修復，並增強小鼠EPC的黏附和遷移,有關機制尚未明確。研究證實eNOS是骨髓來源EPC參與動脈損傷後再內皮化的關鍵分子。本項目擬首先觀察硫化氫對WT、eNOS基因敲除小鼠頸動脈損傷後EPC動員、血管再內皮化和血管內膜增殖的作用；然後通過構建WT/Tie-2-GFP、 eNOS基因敲除/Tie-2-GFP嵌合鼠，觀察硫化氫對動脈損傷後EPC募集的影響，以闡明硫化氫動員EPC，促進損傷血管再內皮化過程中eNOS的關鍵作用。離體實驗部分將使用小鼠骨髓EPC，觀察硫化氫對EPC黏附、遷移的影響，檢測EPC中相關信號通路蛋白和磷酸化水平，並通過阻斷相關分子信號通路，進一步闡明硫化氫經eNOS介導動員EPC的分子機制。研究成果將為深入探討早期血管再內皮化的相關機制，尋找有效治療手段奠定堅實的理論基礎。
結題摘要
目前，加快血管的再內皮化進程是防止冠脈支架內血栓的重要手段。根據我們前期研究發現外源性硫化氫（H2S）能促進動脈損傷後血管內皮的修復、增強小鼠內皮祖細胞（EPCs）的黏附和遷移。通過本課題，我們證實了eNOS 是骨髓來源的內皮祖細胞（EPCs）參與動脈損傷後再內皮化的關鍵分子。首先，成功構建WT、eNOS 基因敲除小鼠的頸動脈損傷模型和兩者的Tie-2-GFP嵌合鼠模型。使用外源性H2S干預後，WT小鼠的損傷血管段藍染區的面積明顯減少，而eNOS-/-小鼠的H2S處理組和空白組比較未見明顯的減少。同時，H2S能以濃度依賴性方式增強EPCs增殖能力、經SDF-1誘導下EPCs的遷移能力和經TNF-a預刺激的內皮細胞黏附能力。而對eNOS-/-小鼠的骨髓源性EPCs的增殖、遷移和黏附的能力，H2S處理組與空白對照組相比無明顯差異。使用不同濃度的H2S干預EPCs後檢測PI3K/Akt通路後發現，H2S能以濃度依賴性方式上調P-Akt蛋白、P-eNOS蛋白的表達水平和一氧化氮（NO）的水平。在阻斷WT小鼠EPCs的PI3K/Akt信號通路後，給予外源性H2S，P-eNOS蛋白的表達水平和NO生成與空白對照組對比無明顯差異。並予eNOS的可逆性抑制劑L-NAME刺激後，H2S處理組的EPCs增殖、遷移和黏附能力與空白對照組對比也無明顯差異。符合預期計畫的構想，在eNOS的介導下，外源性H2S 能加速動脈損傷後再內皮化，而且外源性H2S 能動員EPCs 參與損傷血管內皮修復。外源性H2S 通過激活EPCs 中PI3K/Akt 信號通路，增強eNOS的磷酸化活性，誘導NO合成增加，從而增強EPCs的遷移、黏附及增殖能力。本次課題為外源性H2S 治療血管損傷性疾病乃至預防晚期支架內血栓形成奠定了堅實的理論基礎。
