《ZFP57在人類胚胎幹細胞DLK1-DIO3印記調控中的作用研究》是依託中南大學，由謝平原擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：ZFP57在人類胚胎幹細胞DLK1-DIO3印記調控中的作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：謝平原
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
既往研究提示DLK1-DIO3印記區的正常活化對維持胚胎幹細胞全能性和表觀遺傳穩定有重要意義。我們前期研究發現大氣氧培養易引起該區域異常沉默，生理氧分離培養能維持正常活化，機制不明。同時發現重要的印記調控因子ZFP57在印記活化和沉默的人胚胎幹細胞表達有顯著差異。因此，本研究擬將ZFP57納入印記調控網路探討在大氣氧和生理氧條件ZFP57分別與哪些基因組差異表觀修飾相互作用參與調控？本課題擬首先以印記區處於正常活化狀態的正常受精胚胎幹細胞和孤雌胚胎幹細胞為研究對象，利用CHIP-seq，甲基化分析,CO-IP，ZFP57干擾等方法探討印記區的差異表觀修飾及ZFP57在印記調控中的作用機理。進一步，通過比較活化和沉默細胞系中ZFP57與印記區結合的改變，ZFP57相關觀修飾的變化探討ZFP57在印記沉默中發揮的作用，該研究能完善正常及異常環境下我們對人DLK1-DIO3印記區調控機制的了解。
結題摘要
DLK1-DIO3印記區的正常活化對維持胚胎幹細胞全能性和表觀遺傳穩定有重要意義。本研究比較了正常胚胎幹細胞和孤雌胚胎幹細胞DLK1-DIO3印記區印記基因表達情況和差異表觀修飾，結果提示孤雌胚胎幹細胞高表達母源印記基因，不表達父源印記基因，且兩個關鍵的甲基化區域呈現未甲基化狀態，同時比較了該印記區活化和沉默狀態的表觀修飾差異。在人胚胎幹細胞樣本中採用CHIP-qPCR檢測未發現ZFP57與其他組蛋白結合共同調控DLK1-DIO3區域。基於此對人鼠早期胚胎不同發育階段ZFP57的表達情況進行分析，結果顯示在母源性效應蛋白ZFP57存在種屬特異性，其在小鼠受精卵合子細胞中特異性高表達，而在人類早期胚胎髮育過程直至桑葚胚階段均無表達，進一步我們發現在早期胚胎髮育過程DLK1-DIO3印記區代表性基因MEG3，DLK1在早期胚胎中的變化趨勢與ZFP57類似，均是從囊胚階段開始表達，在建系過程有一上調過程，而建系後急劇下調的過程，我們的研究提示ZFP57對印記的調控作用在人鼠中發揮作用的途徑可能不同，接下來將進一步圍繞建系過程分析DLK1-DIO3印記調控。進而我們利用人純和孤雌細胞系和雜合孤雌細胞系以及，採用SNP晶片分析雜合分布模式和雜合度的方法，制定了在微量細胞水平鑑定單性生殖胚胎的方法，為臨床篩選正常受精且核型正常的1PN胚胎提供了參考。
