UVA誘導自噬對角質形成細胞p53基因表達及其功能的影響

《UVA誘導自噬對角質形成細胞p53基因表達及其功能的影響》是依託北京大學，由趙邑擔任負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：UVA誘導自噬對角質形成細胞p53基因表達及其功能的影響
• 項目負責人：趙邑
• 依託單位：北京大學
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

p53基因在UVA造成的DNA損傷修復過程中發揮著極其重要的作用，並在銀屑病及皮膚腫瘤的發病及治療反應機制中具有重要意義。但UVA對p53蛋白的具體作用機制尚不明。申請人在前期研究中率先揭示了UVA對角質形成細胞（KC）的自噬誘導效應，並發現自噬喪失可導致KC受UVA照射後Nrf-2抗氧化反應活性顯著升高。最新研究表明Nrf-2通過Nqo1及mdm2等途徑對p53表達產生調控作用。因此推測UVA誘導的KC自噬可能會影響p53基因表達及功能，而Nrf-2可能在上述過程起調控作用。本課題擬用siRNA技術誘導人KC的ATG7和/或Nrf-2等基因沉默，研究KC在UVA照射後p53基因表達、蛋白分布以及細胞凋亡狀況，並探討Nrf-2的調控作用，初步揭示假設命題的答案。本研究可能闡明自噬在UVA導致KC損傷、應激及修復過程中的意義，並為銀屑病及皮膚癌等p53相關疾病的發病機制及防治研究提供新思路。

結題摘要

本研究目的在於分析UVA誘導人角質形成細胞自噬的細胞生物學效應。最初主要關注p53等基因表達及其功能的分析。方法：培養HaCaT細胞及原代人角質形成細胞，用ATG7 siRNA，3-MA等自噬抑制劑敲低或抑制細胞自噬。再用UVA照射細胞。通過mRFP-GFP-LC3腺病毒轉染細胞，在共聚焦顯微鏡下觀察分析細胞自噬的發生情況。並通過Affymetrix Microarray分析細胞基因表達譜。結果及結論：ATG7-siRNA無論在HaCaT中還是原代角質形成細胞中均能敲低兩種細胞ATG7的表達。3-MA可以穩定的抑制細胞自噬。一定劑量的UVA-1照射會引起角質形成細胞（HaCaT和人原代角質形成細胞）自噬。但是兩種角質形成細胞在相同的處理條件下自噬相關的ATG7-mRNA表達水平卻完全不同。基因表達譜分析顯示熱休克蛋白70（HSP70）的升高可能與紫外線照射的應激有關。MAPK信號轉導途徑可能具有重要的調控作用。P53相關的一些重要基因發生了表達水平的改變。本研究是UVA誘導自噬及其生物學效應的第一個基因表達譜研究。