《USP17/HDAC2在激素抵抗性哮喘中的作用研究》是依託上海交通大學，由侯小霞擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：USP17/HDAC2在激素抵抗性哮喘中的作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：侯小霞
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
激素抵抗性哮喘是臨床上亟待解決的問題，既往研究認為慢性氣道疾病激素抵抗與氣道局部HDAC2穩定性和活性下降有關。我們前期研究發現USP17能夠調控HDAC2，故推測USP17對HDAC2的調控在難治性哮喘激素抵抗中發揮關鍵作用，本課題擬通過如下研究證實上述假設：① 通過免疫共沉澱驗證USP17和HDAC2存在相互作用，檢測USP17過表達和基因沉默時HDAC2的穩定性和活性，體外明確氣道上皮細胞中USP17對HDAC2的調控；② 採集激素抵抗性哮喘患者誘導痰、支氣管肺泡灌洗液和氣道活檢標本，揭示其氣道局部USP17、HDAC2表達特點；③ 構建USP17氣道上皮條件性基因敲除小鼠哮喘模型，並予激素干預，在體內探究USP17通過對HDAC2的調控在激素抵抗性哮喘中的作用。該研究將為激素抵抗性哮喘的治療提供新的分子靶點。
結題摘要
難治性哮喘/激素抵抗性哮喘是臨床的熱點和難點問題，其發生機制複雜，危險因素較多，臨床上治療困難。故解決哮喘難治問題尤為重要。既往研究認為慢性氣道疾病激素抵抗與氣道局部HDAC2穩定性和活性下降有關。我們課題組採用免疫共沉澱、免疫電泳、過表達和敲低實驗等發現USP17去泛素化HDAC2從而維持其蛋白穩定性。而煙霧等外界刺激會導致氣道上皮細胞USP17表達下降，無法維持HDAC2蛋白穩定性和活性，從而導致哮喘患者對激素治療不敏感。那么USP17可以作為治療吸菸導致的激素抵抗性哮喘的重要靶點。此外，我們課題組還拓寬了難治性哮喘/激素抵抗性哮喘免疫發病機制的研究範圍。首先，流式細胞術和蛋白免疫電泳法均發現去泛素化酶USP4在Th17細胞中高表達，免疫共沉澱方法發現USP4與Th17細胞特徵性轉錄因子RORrt相互作用，並對其蛋白產生穩定作用，從而促進Th17細胞分化以及在Th17/Treg細胞的平衡中發揮重要作用。從小鼠脾臟中富集CD4+T細胞，體外細胞因子刺激（TGF-beta、IL-6等）發現USP4主要通過TGF-beta這一途徑發揮調控作用。通過構建USP4基因敲除小鼠，建立哮喘疾病模型發現，與野生型小鼠對比，USP4敲除小鼠肺部炎症細胞浸潤明顯減少。獲取小鼠支氣管肺泡灌洗液，肺組織和縱膈淋巴結單細胞懸液，FACs分析發現USP4敲除後Th17細胞比例明顯下降，而Treg細胞比例升高，Treg細胞特徵性轉錄因子Foxp3表達量升高。促進Treg細胞向肺組織炎症局部遷移的趨化因子受體CCR6表達也升高。而使用USP4抑制劑處理哮喘小鼠同樣也能抑制氣道炎症。那么，USP4可以作為治療Th17細胞為主的激素抵抗性哮喘的重要靶點。該研究的完成可以拓展難治性哮喘/激素抵抗性哮喘免疫發病機制的探索，豐富哮喘治療的手段，為今後哮喘的個體化治療提供重要依據。
