《TRPC6基因啟動子區-254(C＞G)SNP通過NF-κB調控足細胞功能的機制研究》是依託上海交通大學，由匡新宇擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：TRPC6基因啟動子區-254(C>G)SNP通過NF-κB調控足細胞功能的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：匡新宇
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
細胞內鈣離子內流增加是導致足細胞損傷並最終產生蛋白尿的主要原因之一。業已證明，作為足細胞表面唯一的鈣離子通道蛋白，TRPC6基因突變或表達異常與細胞內鈣離子內流增加密切相關，但其具體調控機制尚不清楚。我們前期研究首次發現TRPC6基因啟動子區-254(C＞G)是調控該基因表達的重要單核苷酸多態性(SNP)，而該變異位點可能與核轉錄因子NF-κB結合參與調控足細胞功能，但其確切分子機制有待闡明。因此本課題以人類足細胞株為研究對象，套用EMSA、基因克隆、基因轉染和免疫共沉澱等技術：（1）明確-254(C＞G)通過NF-κB 介導並調控TRPC6 基因啟動子活性的分子機制；（2）進一步分析TRPC6鈣離子通道及其相關的鈣離子信號通路對足細胞結構和功能的影響，從而闡明-254(C＞G)SNP通過NF-κB調控足細胞功能的可能機制，為蛋白尿發生的分子機制提供新的理論依據。
結題摘要
研究背景 腎病綜合徵是兒童常見的腎臟疾病之一，臨床主要表現為蛋白尿，激素是其主要的治療藥物。但是，10-20%的腎病綜合徵患兒會發展為激素耐藥。我們前期的研究發現激素耐藥腎病綜合徵患兒腎組織TRPC6表達量較激素敏感患兒明顯升高，病情基因檢測提示大部分激素耐藥患兒TRPC6基因攜帶-254C＞G SNP，從而導致TRPC6表達升高，但是具體作用機制仍不清楚。 方法 構建包含TRPC6啟動子區（含-254C 或者G）的雙螢光素酶表達質粒並轉染至人胚腎293細胞和人足細胞中，Luciferase檢測2個細胞系中TRPC6啟動子活性；Human TFBD 預測該啟動子區突變前後轉錄因子結合情況，同時採用ChIP-PCR方法檢測驗證預測轉錄因子是否結合； 最後，使用腫瘤壞死因子-α刺激2個細胞系，再次採用Luciferase檢測TRPC6啟動子活性。 結果 在兩個細胞系中，突變後TRPC6啟動子活性均較突變前顯著升高；Human TFBD 預測並通過ChIP-PCR驗證了TRPC6突變後出現了 NF-κB 亞基 RELA的結合位點；同時，腫瘤壞死因子-α可使得突變後的TRPC6啟動子活性較刺激前顯著升高。 結論 -254C＞G SNP 是TRPC6基因的功能性變異嗎，可能作為中國腎病綜合徵兒童是否出現激素耐藥早期且有效的預測手段。
