《TLR4-NOD2雙識別調控角膜真菌感染的機制》是依託山東大學，由吳欣怡擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：TLR4-NOD2雙識別調控角膜真菌感染的機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳欣怡
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
真菌角膜感染是常見的嚴重致盲眼病，有效調控角膜抗真菌免疫是從根本上防治角膜真菌感染的關鍵。近年研究發現機體存在胞內模式識別受體NOD蛋白家族，以細胞內監測方式啟動抗細菌天然免疫，並和TLR在傳遞信號時交叉對話，相互協調共同調控免疫反應。我們前期研究發現角膜上皮細胞表達NOD2、TLR4-NOD2可能有協同作用。本課題將在初步研究基礎上以TLR4、NOD2為研究靶點，以人角膜上皮細胞和wistar大鼠為研究對象，檢測煙麴黴菌刺激後NOD2及相關信號分子、炎性因子、抗菌肽等的表達變化，並通過分別及聯合阻斷TLR4、NOD2基因表達，觀察煙麴黴菌刺激反應的變化，驗證二者構成雙識別系統參與角膜識別真菌並協同調控角膜抗真菌感染的作用。通過明確NOD2在角膜抗真菌感染中的作用及其與TLR4的相互關係，為角膜抗真菌免疫機制及防治真菌角膜感染提供全新的理論。
結題摘要
角膜真菌感染是常見的嚴重致盲眼病，有效調控角膜抗真菌免疫是從根本上防治角膜真菌感染的關鍵。NOD1、2受體蛋白是NOD樣受體家族中的重要成員，也是內在免疫系統的關鍵受體，主要位於胞漿中。我們前期研究發現人角膜上皮細胞能基礎表達NOD1、NOD2以及TLR2。在我們的研究中，NOD1, NOD2的特異性配體DAP, MDP刺激人永生化角膜上皮細胞能夠促進NOD1, NOD2的表達，並且促進了NOD1，NOD2介導的下游信號分子RIP2 和 NF-κB p65的表達以及炎性因子TNF-α, IL-6, IL-8和抗菌肽hBD2, LL37的分泌。煙麴黴菌孢子刺激體外培養的THCEs, 不同時間點後收取細胞。RT-PCR, WB 結果顯示NOD1及其下游信號分子RIP2 和 NF-κB p65的表達明顯增高，炎性因子和抗菌肽的分泌也同時增加。我們進一步的研究發現，用小干擾RNA阻斷NOD1後，用DAP或煙麴黴菌孢子刺激THCEs，RT-PCR, WB 結果顯示炎性因子、抗菌肽的分泌減少以及NF-κB p65的活性被阻斷。因此，我們的研究揭示，NOD1是人角膜上皮細胞抗真菌天然免疫防禦系統中的重要一員，通過NF-κB通路啟動天然免疫反應。在我們的研究中，我們發現滅活的煙麴黴菌孢子刺激THCEs後，NOD2和TLR2的表達都增高。我們發現TLR2的配體酵母聚糖能夠促進NOD2和RIP2的表達，但是用酵母聚糖刺激THCEs一段時間後，再用MDP刺激THCEs，NOD2，RIP2的表達降低連同炎性因子以及抗菌肽的分泌減少。而且我們發現滅活的煙麴黴菌孢子刺激THCEs後，部分地通過TLR2介導的信號通路來促進NOD2, RIP2 和 IκB-α的表達增高。用小干擾RNA阻斷NOD2後，並不影響滅活的煙麴黴菌孢子誘導的炎性因子的釋放。我們的研究證明在角膜的抗真菌天然免疫反應中，NOD2和TLR2之間有複雜的相互作用，二者構成“雙識別”系統參與角膜識別真菌並協同調控角膜抗真菌感染的作用，從而為角膜抗真菌免疫機制及防治真菌角膜感染提供全新的理論。
