《TLR4信號對B淋巴細胞發育的影響及其生理與病理意義》是依託南昌大學，由李蓉擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：TLR4信號對B淋巴細胞發育的影響及其生理與病理意義
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：李蓉
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
從造血幹細胞到成熟B淋巴細胞發育是一個有序的、多步驟的過程，受到外源和內源信號的嚴密調控。一些病理狀況，如重症感染常伴有B細胞發育異常。本研究旨在闡明TLR信號，尤其是LPS刺激對B細胞發育的影響，並揭示它在感染引起的B細胞減少中可能發揮的作用。具體內容包括：（1）通過分析C3H/HeJ小鼠B細胞發育缺陷，揭示生理條件下TLR4信號在B細胞發育中的作用；（2）利用多種體外培養體系，測試 TLR4信號對B細胞發育過程一些關鍵性節點的影響及其機制；（3）以鮑曼不動桿菌感染為模型，藉助基因缺陷鼠和嵌合小鼠，分析TLR4信號在重症感染引起的B淋巴細胞減少中所發揮的病理作用。以上研究將有助於從一個新的側面認識TLR信號的生理與病理功能，並深化我們對病原體入侵後宿主反應的認識。
結題摘要
我們基本完成了項目申報時列的研究內容，因在課題研究過程中發現了HK-1對preB細胞分化的促進作用，我們將後期研究重點從細菌感染模型的製作轉向了研究HK-1在不同發育階段B細胞發育中的作用及其在LPS刺激B細胞發育成熟中的潛在作用。所獲研究成果概括如下： TLR4在成熟B細胞活化中的作用已明確。但有關TLR4在B細胞發育中的作用知之甚少。在此項目中，我們通過體內、外實驗分析了TLR4激動劑在B細胞發育中的作用，比較了C3H/HeJ和C3H/He小鼠骨髓中B細胞亞群的的組成。結果表明，C3H/HeJ小鼠骨髓中B細胞總數增加，但增加的主要是proB和preB細胞亞群，immature B和mature B 細胞亞群數量無顯著性改變；LPS刺激C57BL/6小鼠後，骨髓中B細胞的組成也與對照組不同。PCR和realtime PCR實驗分析結果表明，TLR4在不同發育階段的B細胞中都有表達，其表達水平隨著immature B細胞發育成mature B 細胞，特別是在immature B 細胞從骨髓遷出至脾臟,發育成mature B細胞過程中顯著性升高。我們進一步分別分選純化了C57BL/6小鼠不同發育階段的B細胞：pre B, immature B, T1 和 FM細胞，分別在有/無LPS, anti—μ，HK-1的環境中培養，在分別通過檢測IgM, IgD, CD21, CD23或CD86等細胞分化指標、CFSE標記、Annexin V和PI染色等手段，觀察了這些因素單獨或協同對不同階段B細胞分化、增殖、存活穩定性和凋亡的影響。結果表明，LPS能抑制preB細胞增殖，通過抑制preB細胞及immatureB細胞的凋亡、促進preB細胞及immatureB細胞的分化來促進B細胞的發育，並且LPS可逆轉anti—μ對preB細胞及immatureB細胞的促凋亡及抑制分化作用；LPS能促進immature B和T1細胞的分化能力，並促進immature B, T1和FM細胞, 特別是FM細胞的存活和增殖能力；HK-1能促進mature B細胞的存活和增殖能力，此促進效應與LPS有顯著性協同作用，並且HK-1和LPS單獨或協同對B細胞的增殖促進作用與TLR4密切相關。綜上所述，我們的研究結果表明：TLR4信號通路在生理和病理狀態下B細胞的發育中都起著重要的促進作用。
