TIP樣蛋白在瘧原蟲免疫抑制中的功能及其機制研究

《TIP樣蛋白在瘧原蟲免疫抑制中的功能及其機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由黃豫曉擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：TIP樣蛋白在瘧原蟲免疫抑制中的功能及其機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：黃豫曉
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

瘧疾是嚴重威脅人類健康的寄生蟲病。瘧原蟲可以通過抗原變異、免疫抑制等途徑逃避宿主的免疫攻擊，因此宿主產生的免疫保護常常是不穩固的，但其具體機制仍不甚清楚。T細胞免疫調節蛋白（TIP）是一種新發現的存在於人和多種動物體內的免疫調節分子，在急性移植物抗宿主疾病模型小鼠體內的研究發現：該蛋白可明顯抑制移植物引起的免疫排斥反應。申請者通過生物信息學分析發現，在多種瘧原蟲中都存在與TIP結構相似的蛋白，項目組前期已獲得的研究結果也證明瘧原蟲TIP樣蛋白和TIP在功能上的確存在著相似性，在抑制宿主對瘧原蟲免疫攻擊方面起重要作用。本研究擬在前期工作基礎上，明確瘧原蟲TIP樣蛋白的細胞定位和表達水平；採用基因敲除等方法進一步證實 TIP樣蛋白在瘧原蟲免疫抑制中的功能；同時研究TIP樣蛋白對淋巴細胞的作用。為進一步闡明瘧原蟲誘發宿主免疫抑制的機制和瘧疾疫苗的研發提供新的理論依據。

結題摘要

瘧疾是嚴重威脅人類健康的寄生蟲病。宿主對瘧原蟲產生的免疫保護是不穩固的，其具體機制仍不甚清楚，給瘧疾研究特別是瘧疾疫苗的研究造成了很大困難。T細胞免疫調節蛋白（T cell immunomodulatory protein，TIP）是存在於人和多種動物體內的免疫調節分子，研究發現：TIP可明顯保護因移植物排斥反應而引起的小鼠死亡。生物信息學分析發現,在多種瘧原蟲中也存在與TIP結構相似的蛋白，本課題主要研究TIP樣蛋白在瘧原蟲免疫抑制中的功能及其機制。研究主要獲得如下結果：① 成功表達了PbTIP-GST重組蛋白，並獲得了PbTIP免疫兔血清，該免疫血清對體外培養惡性瘧原蟲生長具有一定的抑制作用。② PbTIP主要在瘧原蟲的胞漿中表達，惡性瘧原蟲TIP樣蛋白（PfTIP）在滋養體期表達量最高，說明PfTIP發揮功能的主要時期位於紅細胞內的發育中期，提示PfTIP在裂殖子入侵紅細胞過程中可能不會發揮太重要的作用。③PbTIP重組蛋白免疫小鼠後，其抗瘧原蟲攻擊的能力明顯增強。④PbTIP完整胞外域重組蛋白成功表達、純化後，對CTLL-2淋巴細胞分泌IL-4、TGF-β、IL-10等細胞因子及其增殖水平無明顯影響，可能是原核表達的PbTIP蛋白復性後並未很好地恢復天然PbTIP分子原有的空間構象，從而影響其功能的發揮；也可能是CTLL-2淋巴細胞是IL-2依賴的，在IL-2刺激下，淋巴細胞增殖一直處於較高水平，掩蓋了PbTIP蛋白可能的調節作用。⑤構建了含有抗性篩選標記tg-dhfr/ts的同源重組載體，將其線性化後與構建好的TALENs質粒共轉染伯氏瘧原蟲，截止目前，僅獲得外源線性化基因片段以附加體形式存在的瘧原蟲，隨著瘧原蟲的擴增和傳代外源基因片段隨之喪失。當然，也不能排除PbTIP基因無法敲除的可能性。上述研究結果，為進一步深入研究TIP在瘧原蟲免疫抑制中的機制打下了一定的基礎。