TAP1基因作為豬耐受口蹄疫病毒關鍵基因的探索研究

《TAP1基因作為豬耐受口蹄疫病毒關鍵基因的探索研究》是依託中南大學，由陳慧勇擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：TAP1基因作為豬耐受口蹄疫病毒關鍵基因的探索研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：陳慧勇
• 依託單位：中南大學

項目摘要

口蹄疫病毒（FMDV）對當前養豬生產造成巨大危害，相關抗病育種研究工作嚴重缺乏。TAP（抗原遞呈相關轉運蛋白）引發的是機體最重要的抗病毒細胞免疫機制，此機制也正是口蹄疫病毒攻擊的重要對象。TAP1作為TAP的一亞基，其基因擁有廣泛的多態性和不同轉錄本結構。本研究將利用近幾年在湖南地區廣泛流行的口蹄疫病毒對擁有TAP1不同轉錄本的PK15和LLC-PK1細胞進行攻毒實驗和感染動物的群體調查，探討TAP1基因結構或表達的變化對機體耐受FMDV能力的影響及可能的作用機制,並就群體數據分析TAP1等位基因與轉錄本的對應性，探索TAP1基因成為豬耐受口蹄疫病毒的關鍵功能候選基因的可能性。

結題摘要

TAP（Transporter associated with Antigen Processing，抗原遞呈相關轉運蛋白）是細胞內源性抗原加工遞呈途徑的一關鍵因子，參與了干擾素γ（IFN-γ）介導下的病毒抗原細胞遞呈，在機體抵抗病毒感染機制中發揮著重要作用。本研究首先進行大樣本量不同豬種的TAP1基因群體遺傳學篩查，發現TAP1基因存在廣泛的遺傳多態，與豬群的整體健康狀態及注射病毒疫苗後機體內的抗體滴度呈顯著相關，並且在中國地方豬種寧鄉豬的外周血（長沙市沙龍畜牧有限公司寧鄉豬遺傳資源保護庫提供）白細胞內具有較高的轉錄水平。為了進一步研究TAP1基因功能，我們構建了兩種過表達載體及確立其RNA干擾實驗體系，檢測驗證其並不存在異常轉錄本。另外，成功地建立干擾素gamma（IFN-γ）體外誘導TAP1基因表達體系。此體系的建立，能在體外實驗中有效控制O型口蹄疫病毒（毒株由蘭州獸醫研究所保存與提供）對細胞的毒害。利用RNA-seq技術，我們發現IFN-γ不僅可以誘導包括TAP1、TAP2、MHC-I及MHC-Ⅱ在內等一系列基因所在的抗原遞呈通路；還可有效調控P53通路，降低PARP蛋白異常剪接，減少病毒對細胞DNA損傷，而可能抑制細胞凋亡。同時我們也發現OAS1、OAS2、MX1、IFIT1、RIG-I在干擾素預處理的攻毒組表達顯著升高，而且與PARP的變化一致，說明IFN-γ增強了RIG-I通路的表達，誘導了I型干擾素途徑的發生。兩型干擾素系統共同作用以抵禦病毒對細胞的侵染。這些研究結果將為以後口蹄疫病毒防治提供新的思路。