SUMO-1基因在肝癌侵襲與轉移中的作用及機制研究

《SUMO-1基因在肝癌侵襲與轉移中的作用及機制研究》是依託南昌大學，由郭武華擔任項目負責人的地區科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：SUMO-1基因在肝癌侵襲與轉移中的作用及機制研究
• 項目類別：地區科學基金項目
• 項目負責人：郭武華
• 依託單位：南昌大學

項目摘要

研究表明SUMO-1基因和惡性腫瘤發生髮展關係密切。我們前期研究發現在肝癌標本及肝癌細胞中，SUMO-1基因均顯著高表達。通過RNAi方法，抑制HCCLM3中 SUMO-1基因表達，劃痕實驗、Transwell侵襲實驗顯示細胞遷移及侵襲能力下降，表明SUMO-1基因和肝癌的侵襲與轉移有關。本項目擬通過RT-PCR、western blot及免疫組化進一步研究SUMO-1基因和肝癌病程、病理、療效等臨床病理參數的關係；採用RNAi方法穩定抑制肝癌高轉移細胞株中SUMO-1基因的表達，通過體外、體內實驗來研究對肝癌侵襲與轉移的影響，通過RT-PCR、western blot來研究SUMO-1基因表達抑制後與肝癌侵襲與轉移相關基因、信號通路的變化；通過蛋白組學方法來發現新的SUMO-1基因調控蛋白，進一步闡明SUMO-1基因和肝癌侵襲與轉移的關係。為以SUMO-1基因為靶點診治肝癌提供實驗依據。

結題摘要

SUMO修飾在癌症的發生髮展中具有重要的作用，本項目的研究出發點是以SUMO修飾為靶點，研究抑制SUMO修飾對肝癌侵襲與轉移的影響，為以SUMO修飾為靶點治療肝癌提供實驗依據。但由於研究發現抑制SUMO-1基因表達後出現SUMO-2基因表達水平的增高，可以替代SUMO-1基因的部分功能，因此為研究SUMO修飾在肝癌侵襲與轉移中的作用，後續研究以SUMO修飾家族中的唯一的E2連線酶UBC9為靶點進行實驗，E2連線酶UBC9表達抑制將導致肝癌細胞SUMO修飾功能的抑制。研究獲得如下的研究結果： 1、通過檢測100位肝癌患者的標本，對比檢測肝癌及癌旁組織，通過免疫組化及western blot實驗發現，UBC9基因在肝癌中的表達水平明顯高於癌旁肝組織，並且UBC9基因的表達水平與臨床預後密切相關； 2、將UBC9 shRNA轉染肝癌細胞HepG2和MHCC97h抑制UBC9基因的表達，CCK-8實驗檢測證實可抑制肝癌細胞增殖。下調UBC9基因的表達，肝癌細胞凋亡水平增加，而且主要是通過減少凋亡抑制因子Bcl-2的水平來實現的。NF-κB信號通路關鍵蛋白P65水平下調，這進一步說明下調UBC9促進肝癌細胞的凋亡是通過NF-κB信號通路來實現的。 3、研究下調UBC9後對肝癌細胞侵襲與遷移的影響。研究發現下調UBC9基因的表達後，劃痕與transwell實驗顯示肝癌細胞的侵襲與遷移能力下降。同時我們檢測到β-catenin、TCF-4、MMP2蛋白表達量均下調，即經典Wnt通路受到抑制，由此可以說明UBC9基因可能通過激活肝癌細胞中的 Wnt/β-catenin/TCF-4通路，進而激活下游的靶基因MMP-2，促進肝癌細胞的侵襲與遷移能力。 4、UBC9基因表達下調後，肝癌細胞對阿黴素的敏感性增加，細胞凋亡增加，並且是通過增加凋亡相關蛋白Bax/Bcl-2和cleaved-caspase3/Caspase3的表達來實現的。同時檢測下游相關通路蛋白發現，p-ERK及p-P38表達減少，說明下調UBC9增加肝癌對阿黴素的敏感性是通過ERK/MAPK及p-p38/MAPK細胞信號通路來實現的。