《SSAO抑制劑咖啡因抑制脂肪合成的分子機制研究》是依託北京理工大學，由張永謙擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：SSAO抑制劑咖啡因抑制脂肪合成的分子機制研究
- 依託單位：北京理工大學
- 項目負責人：張永謙
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
由於氨基脲敏感胺氧化酶在肥胖和糖尿病患者中活性顯著升高，其抑制劑的開發一直是研究熱點，不過，目前還缺乏天然、安全、有效的抑制劑。我們的前期研究結果表明，咖啡因在體外和體內可以抑制SSAO酶活性，並顯著降低大鼠血清中甘油三酯的含量，但是其分子機制尚不清楚。本項目提出一個新假說，咖啡因通過抑制SSAO酶活，減少脂肪細胞對葡萄糖的攝取，最終抑制脂肪合成。為了檢驗該假說，擬開展三方面內容：①採用質譜法、計算機分子對接技術和酶活測定法系統研究咖啡因抑制SSAO酶的機理；②針對脂肪合成代謝途徑上的關鍵蛋白質（群）設計QconCAT，發展定量肽段串聯體蛋白質結合多反應監測的絕對定量方法；③建立細胞模型，探索不同時間小鼠脂肪細胞中SSAO活性、含量與咖啡因含量的規律，用QconCAT定量方法研究脂肪合成代謝途徑上蛋白質絕對豐度的動態變化，闡明咖啡因抑制脂肪合成的分子機制。
結題摘要
氨基脲敏感的胺氧化酶（Semicarbazide sensitive amino oxidase，SSAO）是胺氧化酶的一種，具有催化伯胺氧化脫氨基的功能，同時還與內皮細胞介導免疫細胞黏附過程相關，因此也被命名為血管黏附蛋白（Vascular adhesion protein-1，VAP-1）。SSAO作為藥物標靶越來越受到重視，但是目前對於其生理功能以及與肥胖相關的確切機制還不清楚。 咖啡因是常用的減肥藥，我們發現其可以在體外和體內可以抑制SSAO酶活性，在過去對咖啡因減肥機理的報導中，主要集中在脂肪酸氧化的研究。本項目利用蛋白質組方法研究咖啡因對脂肪酸合成代謝蛋白通路的影響，首先，利用高脂飼料建立了大鼠肥胖模型，發現給藥組大鼠脂肪組織及血漿中的SSAO酶活性受到顯著抑制。其次，從Non-target及Target兩方面研究咖啡因減肥機制。一方面採用差異蛋白質組學方法，共檢測到64個差異蛋白，其中40個蛋白上調，24個蛋白下調，並用Westernblot對乙醛脫氫酶ALDH2蛋白進行了驗證。另一方面，設計了並表達了由脂肪合成代謝通路特異性肽段串聯而成的QconCAT（concatamers of Q peptides）蛋白，最佳化了質粒表達的條件、酶切條件，並檢測了肽段18O標記效率。建立了液相色譜質譜多反應監測的定量方法，對脂肪合成代謝通路進行特異性定量,發現肥胖給藥組β-氧化途徑的β-羥脂醯輔酶A脫氫酶顯著上調，與脂肪合成有關的β-酮醯合酶出現下調。這一實驗結果驗證了咖啡因對脂肪合成代謝通路影響機理的假設。最後，將高分辨非變性膠與免疫共沉澱（IP）結合建立了SSAO相互作用網路篩查方法；對大鼠脂肪細胞微粒體中的複合體組成方面進行了全景式篩查，並證明了SSAO與ALDH2的相互作用關係，對SSAO相互作用網路進行了全景全息式的分析，對於揭示其參與的生理過程和所發揮的生理功能提供重要的參考價值。
