《SIRT1通過促進DNA修復和適度上調自噬減輕放射性肺損傷》是依託四川大學，由薛建新擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：SIRT1通過促進DNA修復和適度上調自噬減輕放射性肺損傷
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：薛建新
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
放射性肺損傷(RILI)是肺癌放療常見及嚴重的併發症，限制了腫瘤靶區的放療劑量，目前尚缺乏有效的防治手段。SIRT1是一種依賴NAD+的蛋白去乙醯化酶，參與衰老、能量代謝、炎症和腫瘤等多種生理病理過程，但其在RILI中的作用尚不明確。我們前期研究證實，小鼠全肺照射後，組織中SIRT1表達及活性降低；灌胃給予SIRT1的激動劑白藜蘆醇及靜脈注射攜帶SIRT1的腺病毒均能有效減輕RILI。基於目前的研究證據和我們的前期工作，提示SIRT1可能通過促進DNA損傷修復及適度上調細胞自噬減輕放射線引起的肺組織細胞損傷。本課題將完善前期研究，結合siRNA干擾技術確定SIRT1在上述兩方面的作用。同時，檢測SIRT1下游DNA修復相關分子（Ku70、NBS1、WRN）和自噬相關分子（Atg7、LC3、FOXO3a）乙醯化水平，進一步明確其作用機制。以期為RILI的防治提供新的思路和方法。
結題摘要
放射性肺損傷(RILI)是胸部腫瘤放療常見及嚴重的併發症，限制了腫瘤靶區的放療劑量，目前尚缺乏有效的防治手段。SIRT1 是一種依賴NAD+的蛋白去乙醯化酶，參與衰老、能量代謝、炎症和腫瘤等多種生理病理過程。本研究的目的在於探討SIRT1對RILI的保護作用及機制。 我們研究證實：1、小鼠全肺照射後，組織中SIRT1活性及蛋白表達隨時間進行性下降，但在mRNA水平無明顯變化。2、灌胃給予SIRT1 的激動劑白藜蘆醇（Rsv）可以增加肺組織SIRT1活性，減輕放射性的肺損傷（H&E染色），降低肺組織丙二醛（MDA）及血漿前炎性因子IL-1β和前纖維化因子TGF-β1的濃度。3、過表達SIRT1可以減輕放射性的肺損傷（H&E染色，CT掃描），降低組織中ROS及MDA濃度，減輕血漿IL-1β和TGF-β1的合成，增加小鼠的長期生存。 4、過表達SIRT1可以抑制放射線引起的肺組織DNA損傷（肺組織γ-H2AX染色及western blot檢測），下調乙醯化的Ku70表達。在體外培養的人支氣管上皮細胞(HBE) 及人血管內皮細胞(HUVEC)中，過表達SIRT1顯著抑制細胞受照射後的DNA損傷（彗星電泳，γ-H2AX染色及western blot檢測）；體外co-IP結果顯示細胞照射後SIRT1表達降低，Ac-Ku70增多，過表達SIRT1可以促進Ku70去乙醯化；干擾Ku70可以明顯逆轉SIRT1的DNA損傷修復作用。5、過表達SIRT1可以降低肺組織中NF-κB亞基RELA(P65)蛋白的乙醯化水平；細胞報告基因檢測顯示SIRT1可下調IL-1 啟動子NF-κB結合區域介導的Lucferase 活性，抑制NF-κB 轉錄活性。6、照射後30day，肺組織中自噬關鍵蛋白LC3-II表達增加，凋亡增加，但Beclin1表達無明顯變化；給予自噬抑制劑3-MA後細胞凋亡減少；過表達SIRT1後自噬及凋亡均減少。 結論：SIRT1對放射性肺損傷具有明顯的保護作用。該作用機制可能與以下三方面有關：SIRT1去乙醯化Ku70，促進DNA損傷修復；SIRT1去乙醯化NF-κB RELA（p65）亞基（Lys310），抑制NF-κB 活性，減輕放射線引起的炎症反應；SIRT1抑制過度自噬，減少放射線引起的凋亡。本研究為RILI 的治療提供了新的思路及策略。
