《S100A6通過促進rRNA轉錄進而影響胃癌腫瘤細胞增殖機制的研究》是依託北京大學，由張連海擔任負責人的專項基金項目。
基本介紹
- 中文名：S100A6通過促進rRNA轉錄進而影響胃癌腫瘤細胞增殖機制的研究
- 項目負責人：張連海
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：專項基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
S100A6是我們既往研究在胃癌發現的一個特徵性基因(Am J Pathol. 2010;177:586)，研究中通過免疫螢光雷射共聚焦和免疫電鏡方法觀察到S100A6廣泛表達於腫瘤細胞核仁中，同時顯示S100A6與腫瘤增殖、轉移和侵襲等相關，但其作用機制尚不明確。本項研究項目擬進一步明確S100A6表達於核仁是否可以通過促進rRNA的轉錄進而影響細胞的增殖。預試驗顯示癌細胞株BGC823轉染S100A6過表達後發現rRNA水平與S100A6水平呈正相關。結合文獻，我們假設：S100A6可能通過結合於rDNA的某個片段影響rRNA的轉錄，進而影響腫瘤細胞增殖。為了驗證上述假設，我們擬進行研究:
(1)多個細胞系中檢測S100A6的表達定位並進一步確定S100A6與rRNA表達的關係；
（2）明確S100A6作用於rRNA轉錄的可能途徑。本項目有助於明確S100A6在胃癌進展中的作用。
結題摘要
S100A6可能會與多種靶蛋白相互作用，從而調節細胞骨架成分、細胞生長以及分化。本研究中我們通過探討S100A6是否可以通過刺激rRNA基因的轉錄及影響增殖相關因子的表達進而影響胃癌細胞的增殖。首先，我們通過免疫電鏡以及雷射共聚焦顯微鏡觀察了S100A6在細胞內的表達定位。結果發現S100A6表達於細胞漿中內質網、線粒體等細胞器和胞核，包括核仁。通過S100A6細胞轉染觀察體外S100A6與細胞增殖的關係，並分析其在胃癌石蠟組織切片中與Ki67的表達相關性。統計結果顯示，S100A6與腫瘤細胞增殖（Ki-67 增殖指數）相關（P = 0.043）。S100A6轉染後通過MTT實驗也發現S100A6過表達後細胞增殖能力明顯增強。隨後的研究我們證明S100A6表達與45S pre-rRNA的表達水平呈正相關。此外，S100A6在rDNA可能的結合位點也被檢測，結果表明S100A6在整個rDNA範圍均具有結合力，但在8kb區域特別豐富，且在兩個S100A6不同表達水平的細胞系之間結合明顯不同。此外，通過ChIP-Chip 方法，套用啟動子晶片，我們檢測了S100A6可能調控的下游因子。然後對篩查出的因子進行GO分型，結果顯示1328個細胞因子被篩查出，其中57個因子與細胞增殖相關，25個因子與細胞遷移相關，2個因子與細胞浸潤有關，且通過生物信息學進一步分析發現S100A6可能的結合位點中均有Sp1 結合位點。挑選部分因子進行驗證，檢測S100A6過表達後對其表達的影響，結果顯示S100A6過表達後CDK5、 CDK4等與細胞增殖相關因子表達水平發生明顯改變，總之，S100A6可能會結合到rDNA序列，然後促進rDNA到rRNA的轉錄，進而影響胃癌細胞的增殖。此外，S100A6可能間接地結合到Sp1 結合位點進而調節一些下游相關因子的表達。
