《Robo4基因敲除誘導小鼠年齡相關性視網膜變性及機制研究》是依託汕頭大學，由陳浩宇擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Robo4基因敲除誘導小鼠年齡相關性視網膜變性及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳浩宇
- 依託單位：汕頭大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
年齡相關性黃斑變性（AMD）是嚴重的致盲眼病，其病因和發病機制尚未完全明了，動物模型是研究的重要手段。Slit-Robo4信號系統是維持血管內皮細胞穩定的重要信號，我們的前期研究結果表明激活該信號可以抑制病理性視網膜和脈絡膜新生血管以及血-視網膜屏障破壞。我們還觀察到Robo4基因敲除小鼠出現視網膜下新生血管和視網膜色素上皮變性的表現型，而且隨年齡增加而加重，與人類AMD的病理改變相似。本項目擬採用現代眼科影像技術和光電鏡病理技術評價該小鼠視網膜表現型的發病率和自然病程；採用蛋白質組學研究表現型的發病機制；模擬光照、吸菸、喝酒和高脂飲食等環境危險因素，研究Robo4與這些環境因素相互作用在發病機制中的作用；並且評價轉Robo4基因治療和抗新生血管藥物如VEGF抗體治療該模型的療效。通過本研究將為AMD提供一個新的動物模型，期望能進一步理解AMD的發病機制以及探索新的治療策略。
結題摘要
背景：年齡相關性黃斑變性（AMD）是嚴重的致盲眼病，其病因和發病機制尚未完全明了。Slit-Robo4 信號系統是維持血管內皮細胞穩定的重要信號，我們的前期研究結果表明激活該信號可以抑制病理性視網膜和脈絡膜新生血管以及血-視網膜屏障破壞。此外，Vldlr基因敲除小鼠有視網膜下新生血管，人類AMD 的病理改變。 主要研究內容：研究Slit-Robo基因變異與人AMD的相關性。採用現代眼科影像技術和病理技術評價Robo4和vldlr基因敲除小鼠視網膜的表現型。研究光照、和高脂飲食等環境危險因素在發病中的作用。採用RNA測序研究小鼠視網膜表現型的發病機制，並且尋找新的治療靶點。評價抗新生血管藥物和新的針對治療靶點的藥物對小鼠表現型的治療作用。 重要結果和關鍵數據：結果顯示Robo4 中的rs4078313 與AMD 和PCV 都有相關性，OR分別=0.63和0.52，Slit2的rs1379659隻與PCV有相關性，OR=0.41。Robo4基因敲除小鼠在自發螢光上視網膜有數十個高螢光病灶，組織學上有視網膜色素上皮變性和光感受器變薄，視網膜電圖上在Rod 和Cone 反應中都出現了a 波振幅降低，螢光血管造影發現視網膜血管滲漏，視網膜鋪片免疫組織化學染色發現在外核層和光感受器出現視網膜新生血管，最早在第17天就可以觀察到，且數量隨著年齡的增加而增加。vldlr 基因敲除小鼠在17 天開始出現視網膜下新生血管，隨著年齡的增加滲漏越來明顯，2 個月後趨於穩定。玻璃體注射康柏西普和雷珠單抗均可以減少vldlr基因敲除小鼠脈絡膜新生血管的滲漏，且康柏西普的效果優於雷珠單抗。RNA組測序結果顯示Robo4基因敲除小鼠的Robo4 mRNA水平極低，基因水平表達顯著改變的基因有17個，主要轉錄子顯著改變的有11個。對Robo4基因敲除小鼠、Vldlr基因敲除小鼠和雷射誘導的脈絡膜新生血管小鼠進行RNA測序，分析其共同改變的基因，結果顯示只有一個基因在三種模型中有共同的上調，就是Serpina3n。用Serpina3n的特異性抑制劑Minocycline對vldlr基因敲除小鼠進行玻璃腔注射，結果顯示minocycline顯著抑制脈絡膜新生血管，效果與康柏西普類似。 科學意義：本研究表明Robo4基因敲除小鼠是AMD的一個新動物模型，進一步理解AMD 的發病機制，並且發現了一個新靶點。
