《ROS介導的PPARγ磷酸化修飾對腫瘤相關巨噬細胞功能的調控》是依託南京大學，由沈萍萍擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：ROS介導的PPARγ磷酸化修飾對腫瘤相關巨噬細胞功能的調控
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：沈萍萍
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本項目將基於前期工作基礎，對氧自由基ROS介導核受體PPARγ的磷酸化修飾的作用，及其在腫瘤相關巨噬細胞(Tumor-associated macrophages，簡稱TAM)功能調控中的效應進行研究。首先建立TAM促腫瘤發展過程中，胞內ROS水平與PPARγ磷酸化狀態之間的確切關聯，基於此，通過運用自由基檢測分析、分子生物學技術、蛋白質結構分析等手段，研究蛋白質相互作用及機制，發現直接導致PPARγ磷酸化修飾的上游關鍵分子，並了解其它相關功能分子的調節特點，由此建立起ROS介導的TAM功能調控的信號轉導途徑，並揭示信號轉導在TAM促腫瘤發展功能調控中的效應。本研究不僅可揭示ROS的新生物學功能，了解細胞氧化還原網路中，PPARγ翻譯後磷酸化修飾的意義，而且可拓展抗氧化型藥物在腫瘤輔助治療中的新用途。
結題摘要
本項目對氧自由基ROS介導PPARγ的磷酸化的作用，及在腫瘤相關巨噬細胞(Tumor-associated macrophages，TAM)功能調控中的效應進行了研究。在建立了TAM促腫瘤發展過程中，胞內ROS水平與PPARγ磷酸化狀態之間的確切關聯的基礎之上，研究了信號轉導調控過程中的蛋白質相互作用及機制，發現直接導致PPARγ磷酸化修飾的上游關鍵分子，並探討了其它相關功能分子的調節特點，由此建立起ROS介導的TAM功能調控的信號轉導途徑，並揭示了信號轉導在TAM促腫瘤發展功能調控中的效應。研究工作在以下幾方面獲得原創性研究進展： 1. ROS對TAM功能的影響：套用腫瘤動物模型（黑色素瘤、乳腺癌MMTV-PyVT轉基因小鼠、乳腺癌原位種植小鼠、HCC自發與移植腫瘤、TNF-α Knock out等小鼠模型），並同時建立原代及體外TAM模型，分析了胞內ROS水平與TAM細胞表型、功能特徵細胞因子釋放以及其促腫瘤侵襲轉移活性之間的準確關聯。 2. ROS介導的PPARγ磷酸化修飾：在PPARγ Knock down、PPARγ 上游磷酸化激酶MEK1、 Erk Knock down 等一系列細胞模型中，分析建立了TAM胞內ROS水平與PPARγ磷酸化修飾狀態之間的關係。 3. PPARγ磷酸化修飾對TAM功能的調控：構建了PPARγ磷酸化位點突變穩轉株。用腫瘤細胞共培養誘導PPARγ磷酸化位點突變的巨噬細胞，分析TAM細胞表型及促腫瘤細胞抗凋亡、遷移以及侵襲力，研究了PPARγ磷酸化修飾對TAM促腫瘤功能活性的影響。 4. 信號轉導途徑的建立：研究了蛋白分子相互作用機制，發現並鑑定直接與PPARγ結合併引發其磷酸化的關鍵蛋白分子，分析其結構及修飾狀態，建立了ROS介導的PPARγ磷酸化修飾的信號轉導途徑。 5. 信號轉導與生物學效應的聯繫：在動物腫瘤模型中，套用ROS清除劑及激酶抑制劑，達到了抑制TAM中ROS釋放，PPARγ磷酸化與轉位的目的，同時抑制了腫瘤的侵襲與轉移。 本項目不僅超額完成了原計畫任務書中的研究內容，並拓展了抗氧化型藥物在腫瘤輔助治療中的新用途，獲得了有意義的研究結果，共發表SCI論文9篇，中文核心 3篇，修稿SCI論文1篇，參加國際國內會議7次，發表會議論文5篇，申請專利 6項，授權2項。
