《RIPK1調控的NF-κB活化在卵巢癌發生髮展中的作用研究》是依託四川大學，由周斌擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RIPK1調控的NF-κB活化在卵巢癌發生髮展中的作用研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周斌
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
卵巢癌是女性生殖系統三大腫瘤之一，嚴重威脅婦女健康和生命。RIPK1是多條細胞信號轉導通路的重要樞紐因子，可能通過介導NF-κB參與致癌劑等誘導的細胞惡性轉化，在調控細胞存活與凋亡中起著關鍵作用。課題組前期研究了NF-κB重要亞基p50編碼基因NFKB1啟動子區功能性SNP及RIPK1基因兩個Tag SNP，發現這3個SNP位點等位基因頻率及基因型頻率分布在卵巢癌組與正常對照組間有顯著差異。本研究擬從DNA遺傳變異、mRNA和蛋白表達、蛋白亞細胞定位等角度，深入研究RIPK1與卵巢癌發生髮展的關係及其機制；採用質粒轉染和RNA干擾，分別使RIPK1高表達與被抑制，研究其對凋亡的影響和對NF-κB活化的影響。本研究最終目的是明確RIPK1與卵巢癌發生髮展的關係，探明RIPK1對卵巢癌細胞凋亡的影響，以及通過NF-κB調控凋亡的作用機理，探索干預RIPK1表達調控抑制卵巢癌發生髮展的新途徑。
結題摘要
卵巢癌是女性生殖系統三大腫瘤之一，嚴重威脅婦女健康和生命。RIPK1在細胞生存或死亡信號調控通路中發揮著關鍵。本研究採用PCR-RFLP方法，在319例EOC及376例對照樣本中對RIPK1基因Tag SNP位點進行了研究。結果表明：rs9392453的C等位基因增加EOC發病風險，CC基因型攜帶者患EOC風險增加2.27倍；rs6907943-rs9392453組成的CC單倍型患EOC風險增加2.56倍，而CT單倍型患EOC風險降低0.44倍；SNP rs6907943為EOC患者預後的影響因素，AC雜合子EOC患者復發風險降低；rs6907943位點AC雜合子顯著降低早髮型EOC總體死亡率。EOC血漿RIPK1表達水平明顯高於正常對照組，而外周血白細胞中RIPK1基因mRNA表達顯著降低。IHC檢測結果發現癌組織中RIPK1表達顯著高於對照組織。在EOC患者中新發現RIPK1基因突變位點：RIPK1 mRNA：A1577G（蛋白D526G突變）。構建了野生型（WT）、D526G突變型以及shRNA干擾質粒並轉染SKOV3細胞，RNA-Seq篩查各組細胞間差異表達基因，qPCR及Western blot檢測分析。研究結果發現各質粒分別轉染SKOV3細胞24h後，各組間多個基因表達顯著差異：shRNA抑制RIPK1後，IL1R1及TNFSF10等多個基因表達下調，細胞凋亡通路顯著改變；D526G突變型質粒轉染後，p53等多個通路基因顯著改變，且轉錄因子TAF3表達顯著上調，而TAF3促進基因轉錄，發揮抗凋亡作用，因此，D526G突變還可能通過上調TAF3表達，促進多種靶基因表達，抵抗細胞凋亡，促進腫瘤發生髮展；差異表達基因還涉及多個lncRNA及肌動蛋白細胞骨架調控等通路。WST檢測細胞增殖，發現D526G顯著促進SKOV3細胞增殖，而shRNA抑制RIPK1後，細胞增殖顯著降低。Western blot檢測結果表明WT及D526G均促進NF-κB表達，RIPK3表達降低；shRNA抑制RIPK1表達後，RIPK3上調，NF-κB下調，提示RIPK1及其D526G突變可能通過NF-κB信號通路促進EOC發生髮展。本研究首次在EOC中發現RIPK1基因D526G突變，並探討了RIPK1及突變的功能，為EOC發病分子機制研究提供了新的思路與方向。
