《RFPL3調控hTERT及在肺癌發生髮展中的作用和機制》是依託中山大學，由鄧務國擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RFPL3調控hTERT及在肺癌發生髮展中的作用和機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：鄧務國
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
hTERT高表達是腫瘤發生髮展的風向指標，深入研究hTERT調控機制非常必要。預實驗中我們採用新的啟動子結合蛋白垂釣鑑定系統，成功垂釣出hTERT調控因子RFPL3；並發現肺癌細胞中RFPL3特異性地結合hTERT啟動子，激活其轉錄活性，影響細胞生長和凋亡。但RFPL3在調控hTERT及肺癌發生髮展中具體的作用和機制及臨床意義，尚不清楚。為此，本項目擬過表達或敲低RFPL3基因，在細胞及動物模型中，進一步研究RFPL3對hTERT表達、端粒酶活性、端粒長度，細胞生長和凋亡、腫瘤形成、以及相關信號通路的影響，進而明確RFPL3的生物學功能和分子機制。另外，採用組織晶片等技術，分析RFPL3和hTERT在肺癌組織中的表達，並結合臨床資料評估其與肺癌分期、生存、轉移、復發等的相關性，確定其臨床意義。本項目將為揭示肺癌發生髮展機制提供新認識，也為確立RFPL3作為腫瘤治療新靶點提供理論和實驗依據。
結題摘要
hTERT異常高表達是腫瘤進展的一個普遍現象，尤其是在肺癌的發生髮展中，hTERT異常高表達發揮了非常重要的作用，因此深入研究 hTERT異常高表達的調控機制非常必要。我們採用生物素-親和素-瓊脂糖珠垂釣鑑定系統研究了hTERT啟動子結合蛋白，結合質譜鑑定技術，在肺癌細胞中，我們成功垂釣出多個hTERT啟動子調控因子 RFPL3、CBP、CPSF4和KLF4。接著我們在肺癌細胞及動物模型中，過表達或敲低 RFPL3、CBP基因，進一步研究它們 對腫瘤細胞生長、凋亡、腫瘤形成、以及相關信號通路的影響及 對hTERT表達、端粒酶活性、端粒長度的調控，進而明確了RFPL3、CBP基因 的促進肺癌細胞增殖和腫瘤生長的生物學功能和分子機制。此外，我們重點研究了RFPL3和CBP與 hTERT 的關係，結果發現，RFPL3和CBP發生直接的相互作用，CBP乙醯化修飾RFPL3，進而調控後者的功能，兩者特異性地結合到hTERT 啟動子上，並激活其啟動子轉錄活性，影響hTERT的mRNA和蛋白質的表達和其功能活性，進而通過下游的信號通路影響肺癌細胞生長和凋亡, 促進肺癌的發生髮展。最後，利用肺癌組織晶片和免疫組化技術，分析RFPL3、CBP、CPSF4和 hTERT在肺癌組織中的表達，並結合臨床資料評估其與分期、生存、轉移、復發等的相關性，發現三者之間有著明顯的正相關關係，並且在大多數的瘤組織中均呈高表達，它們與臨床不良預後密切關聯，高表達RFPL3、CBP、CPSF4和 hTERT的患者具有較短的生存期。我們的研究結果提示肺癌組織中異常高表達的 hTERT可能是由於肺癌組織中異常高表達的RFPL3、CBP、CPSF4所致, 阻斷RFPL3/CBP/hTERT等信號通路可以明顯抑制肺癌的腫瘤生長和進展。因此，本項目為揭示肺癌發生髮展的分子機制提供新認識，拓展了對hTERT調控蛋白的生物學功能和作用機制的認識，也為確立hTERT調控蛋白作為治療肺癌的新靶點提供理論和實驗依據。
