Ntcp在異煙肼所致肝損傷中的作用及機制

《Ntcp在異煙肼所致肝損傷中的作用及機制》是依託吉林大學，由宋燕青擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Ntcp在異煙肼所致肝損傷中的作用及機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：宋燕青
• 依託單位：吉林大學

項目摘要

抗結核藥引起的肝損傷占藥源性肝損傷的43.78%，居各種藥源性肝損傷（Drug induced liver injury, DILI）病因之首。異煙肼是一線基礎抗結核藥具有明顯的肝毒性。課題組前期研究表明，異煙肼肝損傷大鼠、小鼠模型中，具有肝臟特異性分布的轉運體Na+-牛磺膽酸共轉運多肽（Na+-taurcholate co-transporting polypeptede, Ntcp）表達顯著升高。因此，本項目擬將通過研究異煙肼對肝細胞膜轉運體Ntcp的調節機制，通過“三明治”結構肝細胞的體外實驗及大鼠體內實驗，一方面明確經Ntcp介導的結合型牛磺膽酸在肝細胞內的濃度變化與異煙肼誘導肝損傷的量效關係，另一方面通過HNF4α/PGC1α路徑探究異煙肼上調Ntcp的機制，從而為進一步闡明異煙肼致肝損傷機制，以期為臨床預防和治療異煙肼肝毒性提供新的思路。

結題摘要

Na+-牛磺膽酸共轉運多肽（Ntcp）的表達在膽汁酸吸收入肝的過程中發揮了重要作用，同時其在異煙肼導致的肝損傷過程中也起到了關鍵作用。本課題申請人建立了異煙肼導致的藥物性肝損傷模型，並考察了在此過程總Ntcp的表達請況，以及其調控通路HNF4α和PGC1α的表達。採用雄性大鼠口服灌胃給予異煙肼350 mg/kg，分別給藥7、14和21天，以肝臟病理改變及血清生化指標評價異煙肼誘導的肝損傷程度，免疫組化和Western Blot技術考察Ntcp的定位及表達。採用HPLC-MS/MS測定血清及肝臟中的牛磺膽酸鈉含量。在細胞水平，我們建立了異煙肼誘導的HepG2細胞凋亡模型，並考察了Ntcp在此過程中的作用。大鼠肝功能及肝臟病理改變結果顯示，異煙肼給藥後誘導的肝損傷與Ntcp的上調均在第七天最為明顯，而異煙肼給藥後第14天和第21天肝損傷程度呈好轉趨勢，Ntcp的表達水平也隨之下調。通過對血清中及肝內的牛磺膽酸鈉含量測定結果顯示，隨著Ntcp表達的上調，可引起肝內牛磺膽酸鈉的含量增加，該變化反映了膽汁酸可能在肝內淤積。細胞水平實驗我們也發現，給予6.5、13、26、52和104 mM的異煙肼孵育HepG2細胞24小時後，細胞活力呈濃度依賴性的下降，Western Blot結果表明其Ntcp的表達除了給予異煙肼104 mM濃度外也逐漸升高。當給予Ntcp的抑制劑環孢素A後，可逆轉異煙肼誘導的HepG2細胞活力下降，同時我們還發現細胞凋亡的相關蛋白如Caspase-3、Bcl-2/Bax等的表達也與Ntcp的過表達有關係。最後，我們發現Ntcp的可能調控通路HNF4α和PGC1α的表達也相應上調。因此，通過本課題發現，Ntcp的高表達在異煙肼誘導的肝損傷和HepG2細胞凋亡過程中發揮了重要的作用，且其可能是通過HNF4α/PGC1α通路調控Ntcp的過表達。