Nrf2對NASH肝臟纖維化的保護作用及機制研究

《Nrf2對NASH肝臟纖維化的保護作用及機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由聞勤生擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Nrf2對NASH肝臟纖維化的保護作用及機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：聞勤生
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是我國常見慢性肝病，纖維化是其進展的重要標誌，氧化應激是其重要發病機制。新近證實Nrf2是細胞抗氧化應激反應的中樞調節者，能夠改善NASH炎症，推測有助於抑制纖維化進展。但是，Nrf2對NASH纖維化保護作用及機制如何，目前報導不多。我們前期研究表明Nrf2能夠抑制氧化應激引起的肝星狀細胞（HSC）活化及細胞外基質分泌。在此基礎上，本課題研究Nrf2對NASH纖維化的保護作用及部分分子機制。動態觀察NASH大鼠肝臟氧化應激與炎症、HSC活化及纖維化程度的相關性，探討Nrf2對其影響；建立HSC氧化應激細胞模型，體外實驗深入研究Nrf2對HSC活化、增殖、凋亡及功能的調控作用；採取阻斷劑干擾方法，觀察PI3K/AKT信號通路在Nrf2調節HSC中的分子機制。完成本課題將為闡明Nrf2對NASH纖維化的保護作用及分子機制，對確定新的NASH防治策略具有重要意義。

結題摘要

背景：Nrf2在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）具有保護作用，可能有其抗氧化能力相關，但精確機制不明。 方法：通過慢病毒構建上調或下調Nrf2的穩轉HSC-T6和BRL-3A細胞株，套用葡萄糖氧化酶構建氧化應激模型。MTT檢測細胞存活率，流式細胞儀檢測ROS，Elisa檢測MDA、LDH和SOD水平。RT-PCR和蛋白印記檢測Nrf、p66Shc、IQGAP1等表達情況。最後，套用Nrf2敲除轉基因鼠，通過高脂飲食構建NASH模型，體內實驗探討Nrf2在氧化應激及抗肝纖維化中的作用及機制。 結果：RT-PCR和蛋白印記證實上調或下調Nrf2的HSC-T6和BRL-3A穩轉細胞株的成功構建。氧化模型中，在兩種細胞株上調Nrf2可顯著降低MDA、LDH和ROS水平，同時提高細胞存活率和SOD水平，而下調Nrf2可得到相反的結果。上調Nrf2可下調p66Shc的表達增加IQGAP1的表達，而下調Nrf2則得到相反的結果。最後，高脂飲食Nrf2敲除轉基因鼠模型顯示，Nrf2敲除可以增加肝臟的炎症反應、上調MDA、並上調MDA、TNFα、IL6、Collagen I和Collagen III的水平，下調GSH水平，同時激活組織中NF-κB、上調p66Shc並下調IQGAP1。 結論：Nrf2可通過抗氧化應激、調控炎症和對抗纖維化發揮抗NASH的作用，可能和下調p66Shc和上調IQGAP1表達有關，為Nrf2在NASH中預防及作為治療靶點提供了數據和研究基礎。