《Naive-like重編程狀態的誘導多潛能肝癌幹細胞研究》是依託北京大學，由沈麗擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Naive-like重編程狀態的誘導多潛能肝癌幹細胞研究
- 項目負責人：沈麗
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
前期工作發現OSKM介導C3A人肝癌細胞重編程,獲誘導多潛能腫瘤幹細胞C3A-iPCs,CD44表達並核轉位,內源性重編程基因表達,保持腫瘤幹細胞Primed狀態。Crispr方法敲除CD44基因,獲得CD44KO-C3A-iPCs細胞重編程基因的表達大幅度提高,提示保持腫瘤幹細胞Naive-like重編程狀態。本項目將研究兩種不同狀態的細胞與轉錄調節和表觀遺傳記憶機制。進一步定向肝誘導分化,擬研究Naive-like重編程狀態的誘導腫瘤幹細胞的轉歸。證明CD44基因攜帶表觀遺傳記憶,Primed狀態的誘導多潛能腫瘤幹細胞沒有擦除腫瘤“自已”的表觀標誌,而Naive-like重編程狀態CD44的表觀遺傳標誌被擦除。本研究將揭示誘導多潛能腫瘤幹細胞的Primed和Naive表觀遺傳狀態可在特定的條件下互相轉換,與DNA甲基化和組蛋白修飾機制相關。研究將為臨床腫瘤治療提出新的研究思路和前景。
結題摘要
依據文獻，疏理前期研究工作，採用轉導四個重編程因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc（OSKM）介導C3A人肝癌細胞（HCC）重編程和Crispr敲除CD44等方法，建立誘導多潛能肝癌幹細胞系C3A-iCSCs，發現CD44表達並核轉位、內源性重編程基因表達、保持腫瘤幹細胞狀態。基於此，我們研究了誘導多潛能肝癌幹細胞表型的轉錄調控和表觀遺傳調節的分子機制。探討腫瘤發生中肝癌細胞的“乾性”和多潛能性與基因表達事件之間的重要分子事件，包括①抑制表觀遺傳調節相關的染色質重塑複合體基因MBD3表達，提高肝癌幹細胞（shMBD3-iCSCs）重編程效率；②shMBD3-iCSCs中轉錄因子c-JUN上調，活化多潛能基因，促進上皮間質轉化。MBD3結合在c-Jun的啟動子上，抑制c-Jun轉錄。c-JUN結合在多潛能基因Klf5和Zfp42的啟動子AP-1位點上，直接激活其轉錄。c-Jun的啟動子H3K9乙醯化增加，轉錄上調；③基於人類基因表達譜晶片分析和驗證發現C3A-iCSCs中CD44蛋白可以結合importin β和transportin 1，CD44內化與importin β和transportin 1的轉運功能有關；④Pescadillo（PES1）核仁蛋白與肝癌細胞惡性程度密切相關。CD44通過miRNA作用於PES1的3’UTR區，證實了在肝癌幹細胞C3A-iCSCs中CD44通過miR-105-5p調控PES1的表達來促進細胞的增殖；⑤CRISPRi介導CD44沉默後，誘導多潛能肝癌幹細胞對NK細胞介導的細胞毒性的敏感性明顯下降。CD44 3’UTR主要通過競爭性miR-34a調節ULBP2的表達，調節ULBP2的表達增強肝癌幹細胞的NK敏感性。本項目研究為肝癌的臨床治療提供新的研究視角和科研思路。
