《NS5A/SREBP-1在C肝病毒相關糖脂代謝紊亂中的作用機制研究》是依託天津醫科大學，由喬玲擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：NS5A/SREBP-1在C肝病毒相關糖脂代謝紊亂中的作用機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：喬玲
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
肝脂肪變性和胰島素抵抗是慢性HCV感染者最顯著的病理學特徵,但相關分子機制尚不清楚,近期報導與脂肪代謝的重要調節因子-固醇調節元件結合蛋白（SREBPs）異常表達密切相關。我們在前期工作中發現3a基因型HCV編碼的非結構蛋白5A（HCV-3a NS5A）調節肝癌細胞SREBP-1c的轉錄，影響其脂肪代謝。本項目在此基礎上，套用小鼠肝細胞特異性表達重組NS5A的動物模型，繼以不同時間和劑量的高脂飲食結合STZ誘導，在動物、組織和分子水平研究NS5A/SREBP-1對肝細胞糖脂代謝基因表達的影響，初步闡明NS5A/SREBP-1對HCV感染後易繼發糖尿病的影響、以及NS5A/SREBP-1對肝細胞糖脂代謝的影響，為HCV相關糖尿病研究提供新的理論依據，為臨床提供新的治療靶點。
結題摘要
近年來眾多流行病學調查顯示慢性C型肝炎病毒 (HCV) 感染者中胰島素抵抗 和 2 型糖尿病的患病率明顯高於普通人群和其它原因所致的慢性肝病患者。肝脂肪變性和胰島素抵抗是慢性HCV感染者最顯著的病理學特徵，但其相關分子機制尚不清楚。固醇調節元件結合蛋白-1（SREBP-1）是糖脂代謝的重要調節因子。我們在前期工作中發現 HCV 非結構蛋白 5A (NS5A) 通過轉錄因子 Sp1 調節 SREBP-1 表達，可能與 HCV 感染引起的肝細胞糖脂代謝紊亂密切相關。在此基礎上，本項目在普通飼料和高脂飼料不同餵養條件下、套用小鼠肝細胞特異性表達重組NS5A蛋白和NS5A蛋白片段的動物模型，從動物、組織和分子水平研究NS5A蛋白通過抑制腺苷酸活化蛋白激酶 (AMPK)的磷酸化而影響轉錄因子SREBP-1對肝細胞糖脂代謝基因表達的調節、及高脂飲食對NS5A蛋白調節肝細胞糖脂代謝的作用。本項目通過檢測小鼠血糖和血清膽固醇水平，冰凍切片HE染色和油紅O染色檢測肝組織脂滴形成情況，螢光定量 PCR 檢測脂肪代謝的關鍵酶--乙醯輔酶A 羧化酶 (ACC)、糖異生途徑的關鍵酶--磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 (PEPCK) 的表達，免疫組化檢測磷酸化AMPK、SREBP-1、ACC、PEPCK 和膽固醇代謝的關鍵酶--羥甲基戊二醯輔酶 A 還原酶 (HMGCR)，Western blot 檢測磷酸化AMPK、SREBP-1、脂肪酸合成酶 (FASN)、PEPCK 和 HMGCR 等指標，初步闡明了：①. NS5A 通過抑制磷酸化 AMPK 的水平，促進 SREBP-1 的表達，使脂肪代謝的關鍵酶FASN 和ACC、糖異生途徑的關鍵酶PEPCK、膽固醇代謝的關鍵酶 HMGCR 高表達；②. NS5A domain Ⅱ (aa. 250-355) 通過AMPK/SREBP-1途徑調節肝細胞糖脂代謝基因的表達；③. 高脂飲食和NS5A蛋白對肝細胞糖脂代謝具有協同調節作用。本項目初步揭示了NS5A蛋白通過AMPK/SREBP-1途徑對糖脂代謝基因的調節作用，為HCV相關糖尿病研究提供新的理論依據，為臨床治療提供新的靶點。
