《NLRC4炎性體的調控在清除慢性下呼吸道感染中的關鍵作用》是依託同濟大學，由徐金富擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：NLRC4炎性體的調控在清除慢性下呼吸道感染中的關鍵作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：徐金富
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
支氣管擴張症患者慢性銅綠假單胞菌（PA）下呼吸道感染與定植難以清除，造成大量的醫療資源消耗和患者的死亡。在前期基礎上，申請人擬通過臨床分析支氣管擴張患者巨噬細胞NLRC4炎性體活化程度與PA持續肺部定植感染的相關性，明確巨噬細胞NLRC4炎性體活化不足在PA肺部免疫逃逸中的作用。隨後通過體外實驗分別探討PA菌體、鞭毛以及形成生物被膜的PA對巨噬細胞NLRC4炎性體的活化機制與作用，確定生物被膜包被鞭毛對PA激活NLRC4炎性體的影響。採用野生型或NLRC4基因敲除小鼠建立慢性PA下呼吸道感染模型，通過氣道回輸不同狀態巨噬細胞，探討不同處理方式對體內NLRC4炎性體的活化及PA肺部感染的作用及其對動物生存率的影響。研究將明確NLRC4炎性體激活在清除慢性PA下呼吸道中的地位，並探討調控巨噬細胞NLRC4炎性體活化在干預銅綠假單胞菌肺炎中的關鍵作用，為慢性PA下呼吸道感染的清除探索新途徑。
結題摘要
項目背景：近年來多項臨床研究結果顯示大環內酯類維持治療在多種慢性肺部疾病取得了良好的療效，特別是合併有銅綠假單胞菌感染的患者。但是，其抗炎和免疫調節作用的機制還不十分清楚。為此，本研究擬探討大環內酯類是否通過調控炎症小體的活性來發揮免疫調節作用。 研究內容：在臨床研究，收集NCFB患者使用阿奇黴素前和用藥3-5天后的外周血，分離血漿。使用ELISA方法檢測用藥前後血漿IL-18的濃度。在動物實驗，建立銅綠假單胞菌所致小鼠慢性感染模型，7天后對各組小鼠的肺組織損傷進行評估，對菌負荷量（CFU）進行檢測，計算BAL中總細胞數和分細胞數，檢測炎症小體相關蛋白含量及肺組織病理學研究。在細胞實驗，使用PAO1菌或者鞭毛蛋白作為巨噬細胞炎症小體的激活劑，蛋白質免疫印跡方法檢測不同濃度和不同時間點阿奇黴素或者紅黴素對於炎症小體活性的影響。使用螢光共聚集技術檢測在鞭毛蛋白在活化NLRC4炎症小體時，阿奇黴素對於ROS的影響。 重要結果：臨床研究發現，合併銅綠假單胞菌感染的NCFB病人血漿IL-18水平顯著高於健康對照者，使用阿奇黴素後，其濃度明顯降低。體內研究發現，在銅綠假單胞菌所致小鼠慢性肺部感染模型中，阿奇黴素通過調控炎症小體的活性來緩解肺組織損傷。體外研究發現，在小鼠腹腔源性巨噬細胞，阿奇黴素能夠抑制銅綠假單胞菌誘導的炎症小體的活化。進一步研究發現，阿奇黴素對銅綠假單胞菌鞭毛蛋白誘導的NLRC4炎症小體或者ATP誘導的NLRP3的炎症小體活化均有抑制作用。紅黴素也有類似作用。從機制上講，阿奇黴素通過抑制ROS的產生來調節炎症小體的活化。 科學意義：合併銅綠假單胞菌感染的支氣管擴張症患者可能存在炎症小體的過度激活，炎症小體可能為支氣管擴張症的治療提供新的思路和靶點。探討大環內酯類調節NLRC4炎症小體活性對銅綠假單胞菌慢性感染的作用機制，將為大環內酯類的免疫調節作用提供新的機制，為新藥的開發提供新的思路，為慢性銅綠假單胞菌下呼吸道感染清除開拓更好的途徑。
