《Mig-14參與傷寒沙門菌耐多粘菌素B機制研究》是依託江蘇大學，由生秀梅擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Mig-14參與傷寒沙門菌耐多粘菌素B機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：生秀梅
- 依託單位：江蘇大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
mig-14是沙門菌屬水平轉移獲得的毒力基因，受Phop調節，參與傷寒沙門菌抗多粘菌素B等多種抗菌肽作用，有研究顯示其並不影響脂多糖修飾，具體機制尚不明確。序列分析及本室前期工作均提示Mig-14可能是一種調節因子，因此我們推測，Mig-14有可能通過作用於耐藥相關基因或蛋白質而實現傷寒沙門菌對抗菌肽的拮抗作用。本研究擬採用基因晶片技術，分析多粘菌素B刺激條件下mig-14缺陷株表達譜變化，重點關注耐藥相關基因；運用蛋白表達、凝膠阻滯等試驗，進一步驗證Mig-14對耐藥相關基因表達的調節作用；製備抗Mig-14抗體，結合套用免疫共沉澱及質譜分析技術，尋找與Mig-14相互作用的靶蛋白，以深入探討Mig-14參與傷寒沙門菌耐多粘菌素B的分子機制。本研究將會豐富對傷寒沙門菌耐藥機制及基因表達調控網路的認識，同時為新藥研發提供新的靶點。
結題摘要
mig-14是沙門菌屬水平轉移獲得的致死毒力基因，受Phop調節，其分子功能尚未澄清。有報導稱Mig-14參與傷寒沙門菌耐PB等多種抗菌肽的殺傷作用，但並非通過直接修飾脂多糖結構而實現，其具體機制尚不明確。序列分析顯示Mig-14具有DNA結合蛋白同源序列。本研究通過基因晶片表達譜分析技術初步證實Mig-14是一種調節蛋白，高滲應激條件下可調節多種基因的表達並促進傷寒沙門菌侵襲進入宿主細胞，Mig-14隻有具備完整序列的條件下方可發揮其調節功能。基於此，本研究比較了PB刺激下，野生株和mig-14缺陷株的表達譜差異，發現鞭毛相關基因，編碼孔道蛋白基因ompC，ompF明顯上調；Δmig-14下調基因主要為侵襲及毒力相關基因、毒力島-1效應蛋白基因，Δmig-14中未知功能蛋白t1642，t1643，t1830，t2036的表達與野生株相比下調16倍以上。根據表達譜結果，本研究比較了傷寒沙門菌野生株和Δmig-14的動力，侵襲能力，巨噬細胞的存活能力以及生物膜的形成能力的差異，發現野生株的侵襲能力，巨噬細胞的存活能力均強於Δmig-14，但其動力及生物膜的形成能力低於Δmig-14，具體機制及功能有待進一步研究。Δmig-14中，孔道蛋白基因ompC，ompF明顯上調，本研究因此構建了ompF缺陷株，ompC缺陷株，ompF-mig-14，ompC-mig-14雙缺陷株，及ompF-omp-mig-14三缺陷株，比較各菌株之間耐PB的能力，發現PB條件下，單缺失ompF及ompC對生存能力影響不大，但缺失mig-14後，生存能力明顯降低，再缺失ompF或/和ompC後，生存能力有所提高，但並未達到野生株水平。本研究同時還表達了Mig-14蛋白胞內部分及周質空間部分，製備了相應多克隆抗體，但並未獲得直接作用的證據。綜上所述，Mig-14耐PB的機制有：1、通過抑制ompF和ompC的表達關閉外膜孔道防止PB進入胞內；2、高表達SPI-1，SPI-2相關基因，增加其毒力抵制PB的殺傷作用；3、抑制鞭毛相關基因的表達降低宿主細胞的免疫應答反應抵制PB的殺傷作用；4、通過未知功能蛋白t1642等的直接作用而耐藥，具體機制仍需進一步研究。本研究初步得出Mig-14參與傷寒沙門菌耐PB的作用機制，拓寬了傷寒沙門菌基因表達調控網路，為新藥的研發提供了一些新的靶點。
