《JFK蛋白新底物的鑑定與功能分析》是依託北京大學，由孫露洋擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：JFK蛋白新底物的鑑定與功能分析
- 項目負責人：孫露洋
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
生長抑制因子4(ING4) 屬於II型抑癌基因，從酵母到人中高度保守。ING4蛋白半衰期短，在多種腫瘤組織中低表達，但有關ING4蛋白的調控機制少有報導。JFK是我們實驗室克隆鑑定的未知功能基因，它是人中唯一的含有Kelch結構域的F-box蛋白。前期工作發現JFK通過形成Skp1-Cul1-F-box(SCF) 泛素連線酶複合體識別並降解p53，目前JFK是否可以降解其他底物亟待研究。本項目通過穩定同位素標記胺基酸(SILAC)-肽免疫沉澱-質譜等蛋白質組學方法高通量篩選出ING4可能是JFK的新底物。繼而利用分子、細胞生物學等技術手段，進一步探討JFK下調ING4的分子機制及生物學意義。該研究將揭示JFK是ING4重要的負調控因子，闡釋JFK在細胞及動物水平對血管生成及上皮向間質轉化中的重要作用，為JFK促進腫瘤發生髮展的機制研究提供新線索，為腫瘤防治提供潛在的藥物靶點。
結題摘要
EGFR不但在機體發育中發揮重要的作用，同時EGFR的調節異常與細胞的惡性轉化也有著至關重要的關係，但是目前對EGFR表達水平調控的潛在分子機制仍沒有完全被探究清楚。在這裡，我們證實了鋅指蛋白ZNF516，作為一個抑制性的轉錄因子，能夠和CtBP/LSD1/CoREST複合物相互作用，發揮轉錄抑制作用，同時我們鑑定了一些包括EGFR在內的靶基因。我們發現ZNF516-CtBP/LSD1/CoREST複合物在體外能夠抑制乳腺癌細胞的增值和侵襲潛能，並且在體內能夠抑制乳腺癌的原位生長和轉移。我們的研究揭示了ZNF516作為一個抑制性的轉錄因子，能夠抑制EGFR的轉錄，為EGFR紊亂相關的乳腺癌的理解提供了更加深入的認識，並且為ZNF516在乳腺癌治療中的靶向治療意義提供了新的視角。 ING4屬於生長抑制蛋白家族裡的一員，參與多個細胞過程。已有的文獻報導發現多種惡性腫瘤中ING4蛋白表達下調，然而，基於何種分子機製造成了這些腫瘤調控因子的顯著異常並不清楚。在這，我們報導了ING4與JFK能在體內體外相互作用，JFK通過裝配而成的Skp1-Cul1-F-box E3泛素連線酶複合體介導ING4的多聚泛素化並促進ING4蛋白水平的降解。JFK介導的ING4蛋白水平失穩導致了經典的NFB信號通路靶基因的激活，進一步在體內及體外促進乳腺癌的血管新生和轉移的潛能。我們的研究鑑定了SCFJFK確為一種ING4的泛素連線酶，並揭示了JFK-ING4-NFB調控軸在乳腺癌的發生和發展中起到了重要作用，提示JFK可能成為乳腺癌預防和治療的一個潛在靶標。 儘管BRAF基因突變以及MAPK信號通路在黑色素瘤的發病機制中發揮著及其重要的作用，但是MAPK信號通路如何調節黑色素瘤發生髮展尚不完全清楚。我們發現JMJD6在黑色素瘤中表達明顯升高。RNA-seq結果顯示JMJD6能夠調控MAPK信號通路的重要組分PAK1的可變剪接，促進MAPK信號通路活化，從而促進黑色素合成，黑色素瘤細胞增殖、血管生成和侵襲。有趣的是，我們還發現MAPK信號通路的下游分子c-Jun可以轉錄激活JMJD6，從而形成正反饋環路。我們的研究結果表明JMJD6在黑色素瘤的發生髮展過程中發揮著重要的作用，提供了JMJD6作為黑色素瘤轉移的生物標誌物以及分子治療之潛在靶點的理論依據。
