《Hm2E8-NCTD-liposomes靶向調節HLF/SLUG軸機制的研究》是依託浙江大學，由張晶櫻擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Hm2E8-NCTD-liposomes靶向調節HLF/SLUG軸機制的研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：張晶櫻
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
白血病幹細胞是白血病產生的根源之一，理論上，如果能靶向殺傷全部白血病幹細胞，白血病就有可能徹底治癒。CD19是B系白血病幹細胞（B-LSCs）表面特異性標記，去甲斑蝥素（NCTD）是幹細胞特異性的殺傷藥物，免疫脂質體（immunoliposome）具有生物治療和藥物傳輸的雙重特性。人鼠嵌合性基因工程抗體Hm2E8是本實驗室具有自主智慧財產權的CD19新單抗。本項目採用薄膜分散法結合後插技術製備Hm2E8-NCTD-liposomes，採用流式細胞術、雷射共聚焦顯微鏡和MTT法研究該免疫脂質體在體外細胞和動物模型上具有靶向識別和殺傷B-LSCs作用，採用分子生物學方法闡明其殺傷B-LSCs機制與靶向調節白血病幹細胞相關的抗凋亡軸（HLF/SLUG）密切相關，為Hm2E8-NCTD-liposomes走向臨床提供理論依據。
結題摘要
白血病幹細胞（leukemic stem cells, LSC）是白血病發生、發展及治療後復發的重要原因。研究靶向根除LSC的有效治療方法，則有望治癒白血病，這將對白血病的治療具有十分的重要的科學意義和臨床套用前景。 急性B淋巴細胞白血病存在有免疫表型為CD34+CD19+CD38+/-的白血病幹細胞 。正常HSC免疫表型為CD34+CD19-CD38-，可見CD19是B-LSC特異性標記，能將B-LSC和正常的HSC分開，作為靶向B-LSC的一個良好的靶點。HLF在造血幹細胞中高表達，為正常造血幹細胞命運的調節者。(17，19)染色體易位所形成融合蛋白HLF-E2A使正常造血幹細胞或祖細胞向白血病幹細胞轉化，導致兒童高危前B淋細胞白血病發生和化療耐藥後復發。 免疫脂質體(immunoliposome)是先進的藥物傳輸系統，具有單抗導向和脂質體藥物傳輸的雙重特性。已有偶聯CD19單抗的免疫脂質體治療B系白血病的報導，並取得了令人鼓舞結果。但未見偶聯CD19單抗的免疫脂質體靶向B-LSC的報導。 斑蝥素（Cantharidin）是幹細胞特異性的抗腫瘤藥物，能抑制幹細胞相關的抗凋亡軸——HLF/SLUG軸，誘導AML-LSC和正常HSC的凋亡。其對正常HSC的殺傷作用在一定程度上削弱了對LSC的治療優勢。去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）是斑蝥素的衍生物，對B-LSC的殺傷效率和作用機制還不清楚。 2E8是本實驗室自行研製鼠抗人CD19的單抗，前期已對2E8進行了一系列的人源化改造（Scfv2E8, HmScFv2E8），保留了其親本抗體的靶向性。HAL-01細胞高表達HLF-E2A融合蛋白，其中含有惡性轉化的B-LSC。本研究以HAL-01細胞作為B-LSC株，製備HmScFv2E8-NCTD-liposome，觀察該免疫脂質體對HAL-01細胞靶向識別和殺傷，並研究其對HLF/SLUG軸的作用。具體如下：(1)HmScFv2E8的轉染與表達，HmScFv2E8與NCTD-liposome連線，流式細胞術證明兩者連線成功,雷射粒度測定儀檢測其粒徑；(2)流式細胞術檢測HmScFv2E8-NCTD-liposome對HAL-01細胞的 靶向識別效率；雷射共聚焦顯微鏡觀察HmScFv2E8-NCTD-liposome對HAL-01和Molt-3細胞的靶
