《HRK調節Hedgehog信號轉導的分子機制研究》是依託南京大學，由張青擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：HRK調節Hedgehog信號轉導的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張青
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Hedgehog(Hh)信號通路在動物發育過程中起重要作用。Hh信號通路的失調可導致發育的缺陷及腫瘤的發生。 Hh 通路活性的調節是多層次的,通路的轉錄因子Cubitus interruptus (Ci)是一個重要的調節靶點。我們發現了一新基因,命名為hrk,是維持Hh通路正常活性必需的，hrk RNAi導致Ci蛋白水平顯著下調，由此導致Hh 通路活性下降,HRK調節Hh通路機制不清楚。 本項目以果蠅為模式生物,研究HRK 調節Hh通路的分子機制。該研究具有重要理論意義,可加深我們對Hh 通路調節的認識;同時由於Hh不正常下調可導致新生兒前腦無裂畸形（HPE），研究HRK 維持Hh通路的機制有助於揭示hrk 基因突變與HPE是否有關，如有關則該研究對臨床工作中針對性治療具有重大指導意義。
結題摘要
Hedgehog(Hh)信號通路在動物發育過程中起重要作用。Hh信號通路的失調可導致發育的缺陷及腫瘤的發生。 Hh 通路活性的調節是多層次的,通路的轉錄因子Cubitus interruptus (Ci)是一個重要的調節靶點。我們發現了一新基因,命名為hrk,是維持Hh通路正常活性必需的，hrk RNAi導致Ci蛋白水平顯著下調，由此導致Hh 通路活性下降,HRK調節Hh通路機制不清楚。 本項目以果蠅為模式生物,研究HRK 調節Hh通路的分子機制。取得成果如下：（1）用原位雜交方法(In situ ) 揭示了Hrk表達模式。結果顯示hrk在wing原基廣泛表達。（2）在果蠅翅膀原基中過表達UAS-hrk RNAi 敲降hrk，導致下調Ci及 ptc-LacZ水平。（3）在果蠅翅膀原基中過表達UAS-hrk RNAi 下調Ci水平，但Cipromoter-LacZ水平未受影響，表明Ci下調為蛋白水平,Ci轉錄水平未發生改變。（4）免疫共沉澱（IP）實驗結果表明Hrk可與Ci結合形成複合物。（5）在果蠅翅膀原基中過表達UAS-hrk 上調Ci水平。（6）在果蠅翅膀原基中過表達UAS-hrk-KD（kinase Dead），Ci水平不但未上調 ，反而略有下調，體現Dominant negative作用，表明HRK調節Ci蛋白水平是HRK激酶活性依賴的。進一步研究需闡明HRK識別Ci上什麼位點絲氨酸（S），蘇氨酸（T）或酪氨酸（Y）磷酸化介導Ci穩定性及活性調節的。該研究具有重要理論意義,可加深我們對Hh 通路調節的認識;同時該研究對臨床工作中針對性治療具有重要指導意義。
