《HMGN2分子抗B型肝炎病毒作用的研究》是依託四川大學，由馮雲擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：HMGN2分子抗B型肝炎病毒作用的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：馮雲
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
B型肝炎病毒（HBV）是一種典型的非細胞毒病毒，肝炎的發生是由於抗原特異性的抗病毒細胞免疫反應引起的。研究發現，機體還存在一種非細胞毒的抗HBV的重要保護機制，CD8＋T細胞可分泌一類可擴散分子─CD8抗病毒因子，但其分子基礎尚未確定。申請者研究發現HMGN2是LAK細胞（包括CTL和NK細胞）一個新的免疫效應分子，本項目在已有預試驗結果的基礎上，將在HepG2.2.15細胞模型以及動物模型上全面深入評估HMGN2的抗B型肝炎病毒作用；試驗確定HMGN2抗HBV的作用機制及其作用靶點；檢測並確定在B肝病毒抗原刺激下HMGN2增強表達和分泌的淋巴細胞亞群。研究的預期結果將確定HMGN2是否CTL細胞抗病毒作用的活性分子，並確定其作用機制，將有助於進一步闡明機體抗肝炎病毒免疫保護的分子機制。
結題摘要
申請者研究發現HMGN2是LAK細胞（包括CTL和NK細胞）一個新的免疫效應分子，本項目研究首先成功構建了HMGN2分子的原核表達載體，分離純化了重組表達的HMGN2蛋白，並對純化的HMGN2蛋白進行鑑定及活性檢測；同時從人單核細胞中大量提取天然HMGN2分子，原核表達的和天然存在的HMGN2分子同時用於做後續的功能實驗研究。在HepG2.2.15細胞模型和動物模型中，實驗證明HMGN2分子具有較強的抗HBV活性，HMGN2蛋白（100-1μg/ml）對HBeAg分泌有一定抑制作用，在5μg/ml濃度作用72小時其抑制率可達40%；HMGN2蛋白對HBsAg分泌亦有一定抑制活性；同時，HMGN2可使HepG2.2.15細胞上清液中HBV DNA的拷貝數降低，且隨著藥物濃度和作用時間的增加，其抑制作用逐漸增強，呈現一個明顯的量效和時效反應關係。分別抽提HMGN2分子作用後HepG2.2.15細胞的總RNA和HBV複製中間體DNA，以地高辛標記的HBV重組質粒pHBV4.1位探針，分別進行Northern及Southern雜交，實驗確定HMGN2分子對HBV轉錄與複製水平都有抑制作用活性。HBV DNA聚合酶是研究HBV感染規律和觀察藥效的敏感指標，採用微量直接法檢測HMGN2作用的HBV陽性血清中HBV DNA聚合酶活性，檢測HMGN2分子對血清中HBV DNA聚合酶（HBV-DNAP）是否具有抑制作用及其抑制百分率。實驗結果證明了HMGN2蛋白抗B肝病毒作用 HMGN2蛋白對B肝病毒的DNA聚合酶有抑制作用。同時，實驗證明HMGN2蛋白對Tca8113細胞具有強抑制作用，能夠誘導Tca8113細胞的凋亡；Western-blot實驗檢測Tca8113凋亡蛋白的表達，結果顯示：Tca8113細胞經HMGN2蛋白作用後，細胞總蛋白中凋亡促進蛋白Bax、P53表達量增加，凋亡抑制蛋白Bcl-2表達量減少，Caspase-3表達量減少。體內裸鼠動物試驗也證明HMGN2蛋白能明顯抑制腫瘤生長，HE染色可見細胞壞死。流式細胞分選儀從人血液細胞中分離培養人CD8+ T細胞和NK細胞，檢測HMGN2分子的定位和表達情況。結果顯示NK細胞可分泌和表達HMGN2分子。本研究實驗證明HMGN2可能是NK細胞抗病毒和抗腫瘤細胞的活性分子。
