《HEV編碼microRNA促進病毒複製及調控宿主天然免疫的機制研究》是依託昆明理工大學，由黃芬擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：HEV編碼microRNA促進病毒複製及調控宿主天然免疫的機制研究
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：黃芬
- 依託單位：昆明理工大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
戊型肝炎病毒（HEV）的複製機制尚不清楚。病毒編碼的microRNA可以通過調控宿主細胞靶基因和免疫系統而創造適宜病毒複製的環境。我們前期篩選到一條HEV編碼的microRNA（miR-A6），過表達miR-A6可以顯著增強HEV在體外細胞的複製；同時miR-A6在HEV感染的動物體內呈明顯的組織特異性和時序性表達。通過螢光素酶活性實驗發現，miR-A6對在天然免疫調節中發揮著重要作用的SIRP-α具有調控作用。據此推測miR-A6可能通過調控宿主的天然免疫系統從而介導HEV的複製過程。本項目擬利用雲南優勢流行HEV毒株通過實時定量PCR、流式細胞術、Western Blot和RNAi等技術進一步驗證miR-A6促進HEV在A549和PLC/PRF/5細胞的複製，明確miR-A6促進HEV複製的作用；並探討miR-A6通過調控SIRP-α逃逸宿主天然免疫的作用機制。
結題摘要
戊型肝炎病毒（HEV）是嚴重危害人類健康的病毒性肝炎病原體，然而HEV的複製機制目前尚不清楚。病毒編碼的microRNA 可以通過調控宿主細胞靶基因和免疫系統而創造適宜病毒複製的環境。信號調節蛋白α（SIRP-α）是HEV編碼的miR-A6的靶蛋白，其在天然免疫調節中發揮著重要作用。為了探究HEV是否對SIRP-α的表達具有調控作用，我們將HEV接種A549細胞，結果發現，HEV可以誘導細胞內SIRP-α的表達。miR-A6也可以有效地誘導靶蛋白SIRP-α的表達，並且這種誘導作用是miR-A6所特異性的，miR-A6的突變體轉染細胞後，降低了其對SIRP-α的誘導功能。此外，我們研究發現，miR-A6能夠有效促進HEV複製，過表達SIRP-α同樣可以促進病毒的複製，利用RNAi技術敲低SIRP-α的表達後，HEV的複製受到抑制。為了探究HEV與SIRP-α具有相互作用，我們對HEV的不同ORFs進行驗證實驗。結果發現，HEV編碼的ORF3蛋白的D1結構域誘導SIRP-α的表達。我們通過免疫共沉澱實驗進一步證實了二者的相互作用關係。隨後，我們進一步分析了miR-A6調控宿主天然免疫的作用機制。 通過dsRNA類似物刺激細胞，產生大量IFN-β，接種HEV後發現，HEV可以有效的抑制細胞內IRF3的磷酸化，並抑制IFN-β的表達。我們將miR-A6轉染dsRNA類似物刺激後的細胞，結果發現miR-A6能夠有效的抑制細胞內IRF3的磷酸化，抑制IFN-β的表達。細胞敲除SIRP-α後轉染miR-A6真核表達載體後，發現miR-A6對IRF3的磷酸化和IFN-β的表達的抑制能力明顯降低。同時我們還發現，ORF3蛋白的D1結構域可以通過與SIRP-α相互作用，有效抑制細胞內IRF3的磷酸化，抑制IFN-β的表達。結論，HEV自身編碼的miRNA-A6在病毒感染過程中，能夠有效誘導宿主細胞內SIRP-α的表達，抑制宿主細胞內IRF3的磷酸化，抑制I型干擾素的合成，從而有效促進HEV的複製。本研究為HEV的複製機制提供了新的理論基礎，為HEV體外培養提供新的思路。
