《Graves病MicroRNAs/mRNAs調控網路及其分子機制研究》是依託復旦大學，由張進安擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Graves病MicroRNAs/mRNAs調控網路及其分子機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張進安
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Graves病（GD）是多種因素參與的自身免疫性疾病，數十年前發現GD存在Th1/Th2平衡失調。近年來新型免疫細胞的發現開闢了GD研究的新紀元。我們及他人的研究發現GD存在Treg、Th17和Tfh細胞及相關因子Foxp3、IL-17、IL-23、CXCR5等的異常。但僅幾個細胞或因子難以解釋這種複雜疾病的免疫網路紊亂。基因晶片可同時檢測成百上千個基因的表達（mRNA），且有助於分析各種細胞及因子的相互作用。MicroRNA（miRNA）是一種內源性表達的非編碼小RNA, 對靶基因的表達起抑制作用。已證實腫瘤、免疫性疾病等存在miRNAs的表達異常。miRNAs通過調節靶信號分子的表達，調節細胞的增殖分化與功能，從而參與疾病的發生髮展。本課題擬通過基因晶片技術觀察GD病變組織的細胞因子表達譜（mRNA）、miRNA表達譜，以闡明GD的發生機理，為開闢生物治療的新途徑奠定基礎。
結題摘要
本課題採用miRNAs晶片、mRNAs晶片技術，檢測GD患者甲狀腺組織差異miRNAs及mRNAs表達譜，並通過實時定量PCR(quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)技術對部分晶片結果進行驗證。Western Blot(WB)、體外細胞抑制實驗及雙螢光素酶報告基因檢測對候選致病基因miR-660及其靶基因SDC1在GD中的表達及功能進行進一步分析，探討miRNAs及其靶基因在GD發生、發展中的作用。實驗證實：與正常對照相比，GD患者甲狀腺組織差異表達miRNAs共23個，其中上調錶達5個，下調錶達18個（表達倍數比≥1.3且P＜0.05）；差異表達mRNAs共1251個，其中上調錶達805個，下調錶達446個（表達倍數比≥2.0且P＜0.001），且上調錶達mRNAs多與免疫應答相關通路密切有關，如刺激物應答、防禦應答、損傷及應激應答、白細胞和淋巴細胞活化等。（2）整合數據分析顯示，miR-22及其靶基因外胚層發育不良蛋白（EDA）、甘氨酸脒基轉移酶(GATM)、髓系/淋巴或混合譜系白血病易位蛋白4(MLLT4)，miR-183及其靶基因激酶錨定蛋白12(AKAP12)、多類型鋅指蛋白12(ZFPM2)，miR-101及其靶基因前B細胞白血病同源盒3(PBX3)，miR-197及其靶基因軟骨中層蛋白焦磷酸水解酶(CILP)，miR-660及其靶基因多配體蛋白聚糖1(SDC1)，可能是與GD發病有關的候選致病基因。（3）qRT-PCR及WB結果顯示，SDC1高表達於GD患者甲狀腺組織；miR-660以非專一、直接結合方式，輕度抑制SDC1表達，抑制率為11%。因此，異常表達的miRNAs、mRNAs參與了GD的發病。GD患者甲狀腺組織差異表達miRNAs/mRNAs譜的建立，對於我們全面理解GD發病機理提供了數量龐大的理論依據。SDC1在GD患者甲狀腺組織的高表達，提示其可能通過促炎效應參與了GD的發病，而miR-660作為調節SDC1表達基因組成員中的一種亦參與了GD的發生。
