《FLJ20420通過PKA/CREB通路促進肺癌轉移分子機制的研究》是依託天津醫科大學，由李穎擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：FLJ20420通過PKA/CREB通路促進肺癌轉移分子機制的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李穎
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
本課題組前期發現FLJ20420在肺癌細胞和組織中與侵襲轉移呈正相關，且FLJ20420可能通過PKA/CREB信號通路促進肺癌轉移。本研究擬通過免疫共沉澱和活體成像等技術，從分子、細胞、動物及體內外水平，明確FLJ20420通過PKA/CREB通路促進肺癌轉移的作用，同時研究FLJ20420與PKA/CREB信號通路及其相關分子之間的關係及作用方式。闡明其是否通過PKA/CREB通路及WASP等相關靶基因促進肺癌的侵襲轉移以及其與以上信號分子之間的相互作用及分子機制，進而明確能否通過抑制FLJ20420調控PKA/CREB信號通路下調WASP及F-actin表達，抑制肺癌細胞轉移，探討以FLJ20420為靶點抑制肺癌侵襲轉移的分子機制。為針對肺癌轉移特定分子靶點研究和開發抑制或/和逆轉肺癌轉移的小分子靶向藥物提供理論基礎和實驗依據，具有重要的理論意義和臨床套用前景。
結題摘要
前期發現FLJ20420在肺癌細胞和組織中與侵襲轉移呈正相關，且FLJ20420可能通過PKA/CREB信號通路促進肺癌轉移。本研究擬通過免疫共沉澱等技術，從分子、細胞水平，明確FLJ20420通過PKA/CREB通路促進肺癌轉移的作用，同時研究FLJ20420與PKA/CREB信號通路及其相關分子之間的關係及作用方式及其與以上信號分子之間的相互作用的分子機制，進而明確能否通過抑制FLJ20420調控PKA/CREB信號通路下調WASP及F-actin表達，抑制肺癌細胞轉移。研究結果發現，發生轉移的肺癌組織中FLJ20420基因表達明顯高於無轉移組，且在FLJ20420基因低、中、高表達組，患者發生轉移的比例依次增高；在細胞侵襲轉移和劃痕實驗中，將FLJ20420基因沉默後，細胞的侵襲轉移及遷移率均明顯降低，過表達FLJ20420基因後細胞的侵襲能力和轉移能力均明顯增強；EDU kit檢測細胞增殖發現FLJ20420基因干擾組與對照組相比，細胞增殖率有所降低，FLJ20420基因過表達組與空載體組比較，細胞增殖明顯增加；FLJ20420基因干擾後細胞平板克隆形成率降低，過表達後細胞平板克隆形成率明顯升高；FLJ20420沉默後CREB及WASP表達均有降低，過表達FLJ20420後兩者表達均有明顯升；免疫螢光發現FLJ20420干擾後CREB及WASP及其蛋白磷酸化形式表達均有降低，過表達FLJ20420後相關蛋白表達均有升高；FLJ20420在肺癌組織中表達高低與肺癌組織細胞的高低分化明顯有關，分化越低FLJ20420表達水平越高。同時其表達與肺癌的轉移也顯著相關，表達越高發生轉移的可能性越大。肺癌組織及癌旁正常組織中FLJ20420、CREB表達差異顯著，癌組織中FLJ20420、CREB表達均高於癌旁正常組織，分析還發現兩者表達有明顯的相關性；PKA信號通路激活劑和抑制劑對FLJ20420的表達無明顯影響，PKA通路激活劑對PKA-R1、P-WASP、Profilin、Cofilin等有恢復作用；Co-IP技術檢測FLJ20420及CREB、PKA確實形成了複合物進一步證實FLJ20420可能通過與CREB、PKA形成複合物參與調控信號通路而促進肺癌的侵襲轉移。為針對肺癌轉移特定分子靶點研究和開發抑制或/和逆轉肺癌轉移的小分子靶向藥物提供理論基礎和實驗依據。
