《EFEMP1促進宮頸癌微血管生成的分子機制研究》是依託南昌大學，由宋恩霖擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：EFEMP1促進宮頸癌微血管生成的分子機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：宋恩霖
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們前期研究證實EFEMP1促進宮頸癌血管增生且其機制可能與上調VEGF水平有關。目前有研究表明，EFEMP1能結合併活化EGFR，而我們預實驗結果顯示EFEMP1作用下宮頸癌細胞p-44/42MAPK、VEGF和Jagged1表達升高。Jagged1能激活內皮Notch信號促進血管生成，故推測EFEMP1可能通過EGFR激活下游MAPK進而上調靶基因VEGF和Jagged1表達，從而同時調節腫瘤細胞血管誘生和內皮血管形成能力。本研究通過免疫共沉澱證實宮頸癌細胞中EFEMP1與EGFR的結合，western blotting 檢測磷酸化MAPK、VEGF和Jagged1的表達，構建三維細胞培養體系觀察內皮細胞管腔形成能力，並結合基因轉染、RNAi、裸鼠腫瘤模型和腫瘤組織微血管密度檢測等方法研究EFEMP1通過EGFR-MAPK-VEGF/Jagged1信號途徑促進宮頸癌血管生成的分子機制。
結題摘要
前期研究已證實EFEMP1能促進宮頸癌微血管生成，本課題在此基礎上進一步研究EFEMP1促進宮頸癌微血管生成的分子機制。實驗結果顯示，EFEMP1能與EGFR相互作用，且作用後宮頸癌細胞中p-EGFR（P＜ 0.001, P=0.004）和p-MAPK(P＜0.001; P=0.001) 都分別顯著高於未處理組和EGFR抑制劑與EEMP1聯合處理組。EFEMP1處理組癌細胞上清液作用下的內皮細胞的活力（P=0.001；P=0.004）、遷移能力（P=0.002；P=0.008）和管腔形成能力（P=.001；P=0.009）都分別顯著高於未處理組和聯合處理組上清液作用下的內皮細胞。處理組宮頸癌細胞的p-MAPK（P=0.028；P=0.042），VEGF （P=0.013；P=0.008）和Jagged1(P=0.026; P=0.024)的表達水平都分別顯著高於未處理組和MAPK抑制劑與EFEMP1聯合處理組。此兩方面實驗結果說明，EFEMP1活化EGFR-MAPK信號，上調VEGF和Jagged1的表達而促進宮頸癌細胞血管誘生能力。LV-JAG1-RNAi成功地轉染宮頸癌細胞，再用EFEMP1處理，取其上清液作用於內皮細胞，並與EFEMP1作用下正常宮頸癌細胞上清液處理的內皮細胞和該上清液與Notch抑制劑聯合作用下的內皮細胞作比較，發現宮頸癌細胞Jagged1RNAi (P=0.006) 和內皮Notch信號抑制(P=0.008) 都能顯著減弱內皮管腔形成能力,而直接抑制宮頸癌細胞Notch信號對內皮的管腔形成無明顯影響。這說明Jagged1促進內皮管腔形成是是通過活化內皮Notch信號而不是癌細胞本身的Notch 信號。組織學水平實驗顯示，在人宮頸癌組織中，EFEMP1，p-MAPK和Jagged1的表達三者呈兩兩正相關，且p-MAPK和Jagged1與宮頸癌微血管密度正相關。動物實驗結果顯示，Jagged1干擾組腫瘤的平均體積（P=0.001）、重量（P=0.002）和瘤體微血管密度（P=0.014）都顯著低於對照組。本課題證實，EFEMP1與EGFR相互作用激活MAPK-VEGF/Jagged1信號通路促進宮頸癌微血管生成，為以EFEMP1為靶點的抗腫瘤血管生成研究提供可靠的理論基礎和實驗依據。
