EADAM降解法

Eadam降解法，是從多肽鏈游離的N末端測定胺基酸殘基的序列的過程。N末端胺基酸殘基被苯異硫氰酸酯修飾，然後從多肽鏈上切下修飾的殘基，再經層析鑑定，餘下的多肽鏈（少了一個殘基）被回收再進行下一輪降解循環。

基本介紹

• 中文名：EADAM降解法
• 解釋：化學法對蛋白質進行測序的方法
• 主要涉及：耦聯、水解、萃取

特性

P. Edman降解測序主要涉及耦聯、水解、萃取和轉換等4個過程。首先使用苯異硫氰酸酯（PITC）在pH9.0的鹼性條件下對蛋白質或多肽進行處理，PITC與肽鏈的N-端的胺基酸殘基反應，形成苯氨基硫甲醯（PTC）衍生物，即PTC-肽。然後PTC-肽用三氟乙酸處理，N-端胺基酸殘基肽鍵被有選擇地切斷，釋放出該胺基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接下來將該衍生物用有機溶劑（例如氯丁烷）從反應液中萃取出來，而去掉了一個N-端胺基酸殘基的肽仍留在溶液中。萃取出來的噻唑啉酮苯胺衍生物不穩定，經酸作用，再進一步環化，形成一個穩定的苯乙內醯硫脲（PTH）衍生物，即PTH-胺基酸。

留在溶液中的減少了一個胺基酸殘基的肽再重複進行上述反應過程，整個測序過程現在都是通過測序儀自動進行。每一循環都獲得一個PTH-胺基酸，經HPLC可以鑑定出是那一種胺基酸。Edman降解的最大優越性是在水解除去末端標記的胺基酸殘基時，不會破壞餘下的多肽鏈。

當蛋白質中含有一個或多個半胱氨酸殘基時，有時一對半胱氨酸殘基會通過二硫鍵交聯。在這種情況下測序，首先要經過處理（如用過甲酸處理）切斷二硫鍵，然後再進行Edman降解測序。