《DLBCL中PI3K催化亞單位異常及其在Akt活化中作用的研究》是依託復旦大學，由周曉燕擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：DLBCL中PI3K催化亞單位異常及其在Akt活化中作用的研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周曉燕
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Akt/mTOR 信號傳導途徑在瀰漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL）中有組成性激活，並可望成為DLBCL治療的新靶點，但其活化機制尚不清楚。本課題以PI3K催化亞單位中的PIK3CB和PIK3CG基因為研究目標，首先在DLBCL組織中檢測PIK3CB基因擴增及其與蛋白和mRNA表達的關係；同時觀察PIK3CG的蛋白和mRNA表達與該基因拷貝數異常和啟動子甲基化的關係；分析兩者與DLBCL分型和Akt活性的相關性；然後在體外分析DLBCL細胞株中PIK3CB和PIK3CG基因狀態及表達水平，進一步通過基因轉染、RNAi和去甲基化等多種手段證實PIK3CB和PIK3CG基因異常對DLBCL中Akt活性及細胞生物學行為的影響。通過上述研究，將明確DLBCL中 PI3K介導的Akt活化機制及與DLBCL分子分型、細胞生物學行為的關係，並為針對PI3K/Akt信號通路更精確位點的靶向藥物套用提供依據。
結題摘要
本課題分別從體內外對DLBCL中PI3K各亞單位DNA拷貝數、mRNA和蛋白表達、抑制PI3K及亞單位對pAKT和生物學行為的影響等進行了系列研究，主要研究結果如下：(1)採用高通量Nanostring平台檢測DLBCL中PI3K主要催化亞單位和調節亞單位及其下游AKT亞單位等基因的拷貝數改變（copy number variation, CNV）。其中PIK3CA擴增率15%、PIK3CB 15%、PIK3CD 9%、PIK3CG 12%，AKT1，2，3 均為15%。（2）採用real-time PCR分析DLBCL中PIK3CA、B、D、G基因的mRNA表達， 結果是DLBCL中PIK3CD的表達水平最高，其次為PIK3CB，表達最低的是PIK3CG。PIK3CB、PIK3CD和PIK3CG在AKT的活化中都可能發揮作用。(3)免疫組化的方法檢測PI3K亞單位蛋白表達情況：4個催化亞單位PIK3CA，PIK3CB，PIK3CD，PIK3CG和1個調節亞單位PIK3R1在DLBCL中陽性表達率分別是89.47%，74.19%，90.38%，80.9%和87.5%，其與臨床病理指標均沒有顯著相關性；陽性組較陰性組預後較差，生存期較短，但差異沒有顯著性（p＞0.05）。(3)在6個DLBCL細胞株中，PIK3CD高表達，顯著高於其他亞單位。使用慢病毒介導的質粒載體對DLBCL細胞株LY8的PIK3CD細胞內表達沉默，並通過流式細胞分選獲得PIK3CD基因沉默的穩轉細胞株，進一步研究對細胞增殖、細胞周期和細胞凋亡等生物學行為和腫瘤生長的影響。(4)建立了人DLBCL細胞株LY8裸鼠皮下移植瘤模型並觀察其生長特性，證實了其生長的穩定性和可重複性。(5)PI3K選擇性抑制劑LY294002對人DLBCL荷瘤鼠皮下移植腫瘤生長顯示出明顯的抗腫瘤效應，且呈時間依賴性，LY294002在體內抑制了AKT的磷酸化水平。（6）PI3K抑制劑與化療藥物DOX具有協同作用。（7）FOXP1在結內和結外的表達與腫瘤的形成密切相關。FOXP1在BCL2表達的non-GCB DLBCL的腫瘤形成中發揮重要作用。（8）TNFAIP8 rs1045241C>T在中國人NHL的易感性方面發揮重要作用。本研究結果對了解PI3K各亞單位在DLBCL發生機制中的作用及其靶向治療中的潛在價值具有重要意義。
