《ChREBP基因啟動子高甲基化與動脈粥樣硬化》是依託武漢大學，由鄭芳擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：ChREBP基因啟動子高甲基化與動脈粥樣硬化
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：鄭芳
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
動脈粥樣硬化（AS）與糖脂代謝紊亂、炎症、DNA甲基化密切相關。我們前期發現冠心病患者外周血白細胞碳水化合物反應元件結合蛋白（ChREBP）基因啟動子高甲基化。本課題將進一步探討其機制，為開發AS診斷新指標提供理論和實驗依據。擬：1.流行病學調查冠心病患者白細胞ChREBP基因啟動子高甲基化和炎症因子、代謝產物水平的關係；2.動態觀察不同刺激物處理的單核細胞ChREBP基因啟動子甲基化狀態和細胞代謝指標的變化；3.分析ApoE-/-小鼠動物模型的AS斑塊進程和白細胞ChREBP基因啟動子甲基化程度的相關性。以上實驗結果將證實ChREBP啟動子高甲基化與AS的相關性是通過以下途徑實現的：代謝產物和炎症因子刺激- - ChREBP基因啟動子高甲基化低表達- - 單核細胞糖酵解受抑呼吸爆發- - 單核細胞分化和功能增強。
結題摘要
研究背景 越來越多的研究顯示DNA甲基化與動脈粥樣硬化性疾病相關。本項目組前期研究表明，碳水化合物反應元件結合蛋白（ChREBP）作為糖脂代謝和氧化還原信號通路的重要的轉錄因子，在白細胞中存在差異甲基化。本研究旨在人類和小鼠中探討動脈粥樣硬化疾病中外周血白細胞ChREBP基因DNA甲基化變化及其在疾病發生、發展中的機制。方法 採用重亞硫酸鹽直接測序的方法檢測了120例冠心病患者和96例對照外周血白細胞ChREBP基因甲基化陽性率；採用重亞硫酸鹽結合克隆測序的方法檢測了100例患者和100例對照以及40隻ApoE-/-小鼠和20隻對照小鼠的外周血白細胞ChREBP基因甲基化百分率。通過構建啟動子不同片段的重組子，分析DNA甲基化對ChREBP基因啟動子活性的影響。在隨機抽取的41例患者外周血中分析了ChREBP基因mRNA水平。並收集了患者和對照的臨床指標，採用常規方法檢測了研究對象的血細胞分類計數和臨床生物化學指標，運用高壓液相色譜技術檢測了研究對象的游離脂肪酸的水平。結果 直接測序的樣本中，冠心病組ChREBP基因的甲基化陽性率顯著高於對照組，對照組中甲基化陽性組的ALT水平顯著高於未甲基化陰性組，而且患者血漿游離脂肪酸水平顯著升高。而在克隆測序的樣本中，ChREBP基因的去甲基化與HDL-C和ApoAI血漿濃度的降低有關，與ApoB血漿濃度和白細胞總數的升高有關，ChREBP基因的去甲基化與收縮壓的升高有關；在動脈粥樣硬化小鼠中，ChREBP基因的去甲基化與TG的升高有關，且無論在哪種飲食條件下，ChREBP基因的表達在正常小鼠肝臟中傾向於胞漿表達，而在ApoE-/-小鼠肝臟中呈現相反的情況。啟動子活性分析顯示啟動活性最強的片段是包含CpG島的片段之一，並且DNA甲基化會顯著降低啟動子活性。mRNA分析表明甲基化百分率和表達水平僅在甲基化百分率高於中位數的人群中呈負相關的趨勢。結論 ChREBP基因的去甲基化通過上調基因的表達，與動脈粥樣硬化疾病的風險因素如血漿TG、HDL-C、ApoAI、ApoB和白細胞數存在相關性。
